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PriCells: 正常動(dòng)物胸腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)

時(shí)間:2021-10-9 閱讀:223
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PriCells: 正常動(dòng)物胸腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
 
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 胸腺上皮細(xì)胞來(lái)源;一般取材小鼠或手術(shù)切取的兒童之胸腺;
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2;
3. 有血清培養(yǎng)液:可使用RPMI1640培養(yǎng)液,添加10%胎牛血清、谷氨酰胺2mmol/L、丙酮酸鈉1mmol/L、非必需氨基酸1mmol/L、2-巰基yi醇(2-ME)5×10-5mol/L、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml(Schreiber et al.1991)。也可以DMEM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基;
4. 化學(xué)限定性培養(yǎng)液:基礎(chǔ)培養(yǎng)液為DMEM,添加HDL100μg/ml、轉(zhuǎn)鐵蛋白50μg/ml、胰島素5μg/ml、氫化可de松2.7×10-7mol/L、EGF 10ng/ml、硒25 ng/ml以及三碘甲腺原氨酸(T3)1×10-10mol/L(Schreiber et al.1991);
5. 消化液:原代培養(yǎng)時(shí),從胸腺組織制備細(xì)胞懸液時(shí),所用的消化液為1mg/ml的膠原酶,用含有15%胎牛血清的DMEM配制。傳代時(shí)所用的消化液為0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶混合液;6. 手術(shù)刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪,眼科鑷,止血鉗,無(wú)菌消毒手術(shù)器械;
7. 離心管(15ml、50ml)
 
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 若取材于小鼠,先將動(dòng)物處死,用75%乙醇消毒。打開(kāi)胸腔,取出胸腺。如果取材于手術(shù)切除的兒童胸腺,將所取胸腺組織置于含抗生素的平衡鹽溶液中;
2. 將切取的胸腺組織盡可能去除表面的結(jié)締組織被膜。將胸腺實(shí)質(zhì)剪成約1mm3大小的植塊;
3. 用平衡鹽溶液反復(fù)洗滌植塊,以盡量洗去胸腺細(xì)胞;
4. 在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中,用膠原酶消化液消化約1.5h;
5. 在膠原酶消化液中,將組織塊進(jìn)一步剪碎;
6. 靜置,待組織塊下沉,棄去上清液。將組織塊重新懸浮于無(wú)血清培養(yǎng)液中;
7. 重復(fù)步驟5可達(dá)3次;
8. 將將植塊接種于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi),置37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)器皿可以用生長(zhǎng)基質(zhì)物質(zhì)預(yù)先包被。在原代培養(yǎng)最初6d內(nèi),不更換培養(yǎng)液;
 
注意事項(xiàng):
胸腺上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)最大的問(wèn)題是成纖維細(xì)胞的過(guò)度生長(zhǎng),故抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)是上皮細(xì)胞培養(yǎng)的成功的關(guān)鍵。
 
PriCells提供:
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基;
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑;
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒;
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒;
5. 各種原代細(xì)胞DNA;
6. 各種原代細(xì)胞RNA;
7. 各種原代細(xì)胞蛋白質(zhì);

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