一、細胞基本屬性
細胞名稱：MKN74（人胃癌細胞）
細胞簡稱 ：MKN74
細胞貨號 ：SNL-176
細胞種屬： 人
生長情況 ：貼壁
培養條件 ：1640+10%FBS+1%雙抗
培養環境： air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養操作
換液周期 :2-3天
培養基體積 :T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例 :1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法 :
1.盡量吸干凈T25瓶原培養基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；
4.將培養瓶放入37度培養箱消化；
5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養基終止胰酶消化；
6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的*培養基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養瓶里；
8.補足*培養基，將培養瓶放回培養箱靜置培養；
注意事項 :不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。
三、細胞凍存操作
凍存液配方 :92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規格 :200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法 :
1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；
3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存
注意事項 :凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案
Tips：
1.細胞培養時黑點可能會比較多，具體原因參見培養操作說明2、3條；
我們推薦使用尚恩生物MKN74（人胃癌細胞）專用*培養基（產品貨號：SNLM-176）作為體外培養的培養基。
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