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細胞培養(yǎng)皿實驗時“小黑點”現(xiàn)象的剖析
閱讀：2035 發(fā)布時間：2021-11-5
細胞培養(yǎng)皿適宜細胞和組織的中等規(guī)模培養(yǎng)，也可做稱量、分離和處理組織或細胞等多種實驗中的暫放和儲存容器使用。在使用前要經(jīng)過清潔消毒，培養(yǎng)皿清潔與否對工作影響較大，可影響培養(yǎng)基的酸堿度，若有某些化學(xué)藥品的存在，會抑制細菌生長。
新購的細胞培養(yǎng)皿應(yīng)先用熱水沖洗，再置于質(zhì)量分數(shù)為1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時，使游離堿性物質(zhì)除去，再用蒸餾水沖洗2次。
細胞培養(yǎng)時常見到細胞及培養(yǎng)液中有一些大小不等、形態(tài)不同的未知“黑點”。細胞培養(yǎng)時由于細胞代謝、物質(zhì)交換、周邊環(huán)境變化，尤其是在從37℃培養(yǎng)箱中拿出來觀察的過程中，由于液體培養(yǎng)基的比熱較大，液內(nèi)溫度高于外界溫度，造成冷熱交換、小范圍內(nèi)形成液體流動加劇，當然這些小碎末就會被攪動起來形成似乎“游動”的感覺；隨著細胞培養(yǎng)的繼續(xù)，部分細胞開始衰亡，細胞膜結(jié)構(gòu)破裂，破裂后的細胞內(nèi)容物泄露到培養(yǎng)液中。尤其是溶酶體的破壞，連續(xù)性地造成其他細胞和細胞器的損傷，如果換液不很勤，就會出現(xiàn)進一步破壞和殘渣的出現(xiàn)。“黑點”問題是很多細胞培養(yǎng)者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的問題，但到目前為止尚未找到其監(jiān)測和排除的試劑和手段，這首先是由于所謂“黑點”病原體根本難以收集和捕捉，這也從另一個側(cè)面證明了“黑點”問題的難以確定性；再說任何一種外來的微生物在培養(yǎng)基中都會有生命活動的反應(yīng)和表現(xiàn)，而不是簡單地運動那樣的外觀性表現(xiàn)。
如果“黑點”的運動狀況已經(jīng)到了用顯微鏡已經(jīng)可以觀察出的程度，其營養(yǎng)代謝和能量需求也就可想而知。這樣，培養(yǎng)液中的影響消耗、酸堿含量程度等都要發(fā)生明顯變化。
比如迅速的、大含量的沉淀，pH值的迅速下降，細胞大量破碎死亡、引發(fā)其它類型微生物侵染等等。而這些狀況，在所謂的“黑點”感染中，是很難觀察到的。同時“黑點”的出現(xiàn)而影響細胞狀態(tài)似乎得不到有力的證據(jù)。倒是細胞狀態(tài)下降的時候，“黑點”明顯增多了。很有可能是細胞狀態(tài)下降時，細胞衰亡產(chǎn)生的細胞碎片。所以“黑點”屬于細胞碎片是比較可能和合理的。