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熒光顯微鏡光源以及熒光顯微鏡激發(fā)熒光方式介紹
熒光顯微鏡是利用特定波長的激發(fā)光照射被檢物體產(chǎn)生熒光進(jìn)行鏡檢的顯微光學(xué)觀測(cè)技術(shù)，是醫(yī)院科研、病理、檢驗(yàn)等部門常用的醫(yī)用光學(xué)儀器之一。有些物質(zhì)受紫外線照射后可發(fā)熒光，另有一些物質(zhì)需要用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，可以觀察到普通顯微鏡看不到的細(xì)節(jié)，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都有配備高質(zhì)量或者常規(guī)的顯微成像系統(tǒng)，但是調(diào)整熒光，校正難度較高，因此需要了解熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式。
按光的波長范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍(lán)紫光)兩種。
UV激發(fā)是用短于400nm紫外光進(jìn)行激發(fā)。該法不存在可見的激發(fā)光，所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光，容易判別標(biāo)本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。
BV激發(fā)是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍(lán)光進(jìn)行激發(fā)。適合使用藍(lán)光照射標(biāo)本，用藍(lán)光作為激發(fā)光，熒光色素的吸收效率較高，可得到較明亮的圖像。
BV激發(fā)時(shí)要注意以下2點(diǎn)：
①熒光顯微鏡的截止濾光片要使用可*阻斷藍(lán)光并可充分通過所需綠、黃熒光的濾光片；
②500nm以下的熒光無法看到，而500nm以上會(huì)使整個(gè)圖像顯黃色。
因此，熒光顯微鏡的照明可根據(jù)聚光器的構(gòu)造和激發(fā)光的波長按以下三點(diǎn)考慮。
①從熒光像的反差要求來看，UV激發(fā)暗場(chǎng)聚光器照明。
②以像的亮度來考慮，BV激發(fā)濾光片暗場(chǎng)觀察效率很高。
③UV激發(fā)濾光片暗場(chǎng)觀察和BV激發(fā)暗場(chǎng)聚光器照明的特性，可看作介于這兩種照明方法之間，但前者濾光片暗場(chǎng)的性質(zhì)較強(qiáng)，顯示圖像較明亮，反差小；后者因保留暗場(chǎng)光路的性質(zhì)，故顯示圖像較暗，而反差有所改善。當(dāng)實(shí)際使用熒光顯微鏡時(shí)，應(yīng)采用合適標(biāo)本要求的照明法進(jìn)行觀察。
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