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倒置熒光顯微鏡使用時可能需要的問題有哪些?

閱讀:3138        發布時間:2021-4-19
倒置熒光顯微鏡,是指與一般顯微鏡相比,其物鏡、聚光鏡和光源的位置都顛倒過來,由熒光附件與顯微鏡有機結合構成的顯微鏡。激發光從物鏡向下落射到標本表面,被反射到物鏡中并聚集在樣品上,樣品所產生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發光同時進入物鏡,經雙色束分離器使激發光和熒光分開而成像。物鏡和聚光鏡的工作距離很長,能直接對培養皿中的被檢物體進行顯微觀察和研究。
 
倒置熒光顯微鏡使用時可能需要的問題有哪些?
 
1、正確觀察白光的步驟?
 
將標本置于載物臺上,打開電源開關;將轉盤聚光器調整到明視場,然后將環狀光闌調整到z大光圈;從低倍鏡開始觀察。
 
2、相差環中BF/PHL/PH2等這些字母到底是什么意思?
 
倒置熒光顯微鏡本身是結合了熒光附件和相差顯微鏡的特點。那么在相差環中的這些字母分別代表了:PHL(4×0.13)、PH1(20×0.45)、PH2(40×0.6)、BF代表的是白光。所以如果我們觀察的是熒光,前三種相差是都可以選擇的。所謂的相差可以理解成是對于透明結構的放大處理,因為細胞本身內部結構是透明的,我們想觀察細胞內部結構的時候就需要使用相差。
 
3、無論怎么調整細準焦螺旋,鏡下的圖像都不清楚?
 
這種情況下很可能是鏡頭不干凈,可以用酒精棉擦拭一下鏡面。另外高倍數的物鏡鏡頭外也有一個旋鈕,適當旋轉這個旋鈕也會使畫面變得清晰。
 
4、正確觀察熒光的步驟?
 
關閉室內的燈光,打開白光電源和汞燈電源,一般汞燈需要提前打開10分鐘預熱才能達到zui亮;關閉熒光shutter,用低倍鏡找到細胞位置;關閉透射光按鈕,打開熒光光路shutter,旋轉熒光濾色轉盤;電腦顯示器中觀察。
熒光光路shutter要zui后打開,zui先關閉,這樣可以保護樣本,避免過度的熒光猝滅。
 
5、如何維護汞燈?
 
汞燈在工作時會散發出較大的熱量,因此要保持室內溫度不要過高,具有良好的散熱環境。一個汞燈的工作壽命一般是200個小時,但并不是使用時間越短,觀察的越快,越能延長汞燈的壽命。相反的,如果工作時間越短,反而會讓汞燈壽命減少的越快,所以要盡量減少開關的次數。
 
6、為什么目鏡下觀察到的圖像只有一半兒?
 
出現這種情況的原因一般是CT環調整出現了問題。CT環位于目鏡下方,也叫合軸調中目鏡,有CT/O/S三個參數設置。CT對應的是光路對準了望遠鏡;O對應的是光路中沒有物體;S對應的是光路中有遮光板。那么上述情況就是CT環這個螺旋位于CT和S兩個參數之間。

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