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creative-enzymes 熒光酶的測定

時間:2024/2/29閱讀:982
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Creative Enzymes提供高質量的生物分析服務和合同研究,專門從事酶活性分析,滿足制藥、生物技術和診斷行業客戶的需求。多年來,Creative Enzymes一直是熒光酶檢測領域經驗豐富的公司。我們的測量能力廣泛,涵蓋各種酶,包括氧化還原酶、轉移酶、水解酶、裂解酶、異構酶和連接酶。在解決具體問題、優化操作以及酶活性測量方法開發的過程中,我們始終與客戶密切合作。

熒光是一種發射現象,其中吸收輻射的波長始終低于發射(熒光)波長(能量較高)。熒光酶測定利用產物底物熒光光譜的差異來測量酶反應(圖 1)。吸收光后,基態 (S 0 ) 的熒光團被激發到更高能量的單線態水平。在皮秒時間尺度內發生的快速熱化使受激分子處于第一激發態 (S 1 )的很低振動能級。在系統發射光子后衰減回到基態之前,這種激發單線態可以保持很短的時間(納秒量級)。由于這種激發到基態躍遷的能量通常比激發過程的能量低,因此發射的波長通常比激發的波長更長。這種波長差異稱為斯托克斯位移。實際上,所有熒光數據都可以通過五個參數之一來描述:激發光譜、發射光譜、量子產率、熒光壽命以及發射的各向異性或偏振。

Perrin-Jablonski 圖。 S0 是基態,而 S1 和 S2 是電子激發態。圖 1: Perrin-Jablonski 圖。S 0是基態,而S 1和S 2是電子激發態。
參考文獻: Eccleston JF,Hutchinson JP,Jameson D M。藥物化學進展,2005,43:19-48。

熒光測定廣泛用于確定酶反應的動力學機制,也用于配置高通量篩選的動力學測定。要使用基于熒光的測定進行測量,反應需要從非熒光底物形成熒光產物,反之亦然。第一種情況的一個例子是在水解酶測定中使用非熒光試鹵靈丁酯作為底物,其中酯鍵的酶裂解產生高熒光試鹵靈。后者的一個例子是涉及將 NAD(P)H 氧化為非熒光 NAD(P) +的任何酶反應。熒光共振能量轉移 (FRET) 也可用于酶測定,其中酶促反應改變底物中兩個熒光團的距離或方向,從而改變觀察到的供體或受體的熒光強度。

熒光酶測定通常比分光光度測定靈敏得多,但可能會受到雜質造成的干擾以及許多熒光化合物在光照下的不穩定性。在當前階段,對通常可從人類患者獲得的組織、細胞或液體的小樣本進行診斷酶評估的數量不斷增加,這些測定的高靈敏度特別有價值。熒光測定還特別適合反應混合物的小型化。通過這種方式,可以進一步大幅提高靈敏度,從而減少對酶和熒光底物樣品的需求。隨著非常昂貴或稀缺的熒光底物的出現,后者的保護變得重要。

憑借最新的知識和先進的儀器,Creative Enzymes有信心為客戶提供可靠的熒光酶檢測,提供所有類型酶活性水平的量化。通過不斷追求好的服務,Creative Enzymes贏得了數以萬計客戶的信任。總體而言,Creative Enzymes致力于實現最高的客戶滿意度,并不斷改進服務和質量管理。

 

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