豬胰腺?gòu)椥缘鞍酌富钚缘臏y(cè)定

時(shí)間：2023/8/31閱讀：1115

用 Suc-Ala-Ala-Ala-pNA作為底物進(jìn)行測(cè)定

所需材料

1. Tris緩沖液；0.1 M Tris pH 8.3，25°C。將 6.75 g Tris-HCl 和 8.14 G Tris 堿溶解在 900 ml H ₂ O 中。在 25°C 下測(cè)定 pH 值。如有必要，用 0.1 M HCl 或 0.1 M NaOH 滴定至 pH 8.3。用 H ₂ O稀釋至 1000 ml。

2. NaOAc-NaCl緩沖液；0.05 M NaOAc pH 5，含有 0.1 M NaCl。將 14.8 ml 0.2 M HAc 和 35.2 ml 0.2 M NaOAc 以及 100 ml 0.2 M NaCl 混合。用 H ₂ O 定容至 200 ml。在 25°C 下滴定至 pH 5。

3. 底物溶液；0.1 M Tris pH 8.3 中為 2.5 mM。使用 25 mg 小瓶 N-Suc-Ala-Ala-Ala-pNA（EPC 編號(hào) NS945），用 22 ml tris 緩沖液溶解內(nèi)容物。（注：使用約 10 ml 緩沖液沖洗底物瓶 5 次。）攪拌溶解。儲(chǔ)存于 5°C。

4. 彈性蛋白酶溶液；將 1.0 mg/ml 溶解在 NaOAc-NaCl 緩沖液中。在相同的緩沖液中制備每毫升 0.10 毫克的二級(jí)溶液。將兩種溶液置于冰浴中保持低溫。

程序

1. 將分光光度計(jì)調(diào)節(jié)至 410 nm，池溫度調(diào)節(jié)至 25°C。

2. 將池中 2.5 ml Tris 緩沖液和 0.5 ml 底物溶液平衡至 25°。

3. 添加 0.005 ml 0.10 mg ml 彈性蛋白酶溶液，混合并以 1 分鐘為間隔測(cè)定吸收率的增加率。利率增幅應(yīng)約為。0.025 – 0.040 Δ ₄₁₀ nm 每分鐘。

比活度的計(jì)算

?, 1%, 280 = 19.5 對(duì)于豬胰腺?gòu)椥缘鞍酌?/span>

毫克/毫升 = A ₂₈₀ x 0.51

體積 = 3.005 ml A=410 nm T=25°C 光程=1.0 cm

8.8=pNA在410 nm處的mM消光系數(shù)

單位 = ΔA ₄₁₀ x 3.005 毫升
毫克 8.8 x 0.0005 毫克

品牌 ELASTIN PRODUCTS COMPANY

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抗原：豬胰腺?gòu)椥缘鞍酌福?/span>EPC 號(hào) EC134）

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