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DNA基因合成儀反應(yīng)步驟
基因合成是用人工方法合成基因的技術(shù)，是基因獲取的手段之一，相對于從已有生物中獲取基因來說，基因合成無需模板，因而不受基因來源限制。基因合成有兩種途徑，一是向基因合成公司訂制，二是作本地基因合成。由于基因合成技術(shù)還沒有一個統(tǒng)一的方法，基因合成的技能和經(jīng)驗在合成過程中具有決定性的影響，所以大部分基因合成都是在專業(yè)人員手中完成的，這也決定了途徑一是主要渠道。
DNA基因合成儀合成技術(shù)原理：
采用固相亞磷酰胺三酯法合成DNA的片段,它具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體.上完成DNA鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3'端向5'端合成的,相鄰的核苷酸通過3'→5'磷酸二酯鍵連接。
DNA基因合成儀反應(yīng)步驟：
1.將預(yù)先連接在固相載體CPG上的活性基團(tuán)被保護(hù)的核苷酸與三氯*酸反應(yīng),脫去其5'-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT ,獲得游離的5'-羥基。
2.亞磷酰胺保護(hù)的核苷酸單體, 與活化劑四氮唑混合.得到核苷亞磷酸活化中間體. 它的3'端被活化，與CPG載體上連接堿基的5'-羥基發(fā)生縮合反應(yīng)。
3.帶帽(capping)反應(yīng)。縮合反應(yīng)中會有少量5"-羥基沒有參加反應(yīng).用乙酸酐和1-甲基咪唑封閉5"-羥基,使其不能再繼續(xù)發(fā)生反應(yīng),這種短片段在純化時可以分離去除。
4.在氧化劑碘的作用下,亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯。
