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南京和曦生物科技有限公司
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阿膠衍生物測定

時間:2025/4/21閱讀:225
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阿膠衍生物測定

阿膠HPLC測定主要用于氨基酸,特征肽等的成分分析。

色譜條件

色譜柱:MorphlingTM Amino Acid 4.6*250mm 5µm

流動相A: 0.1mol/L醋酸鈉溶液(pH 6.5):乙睛=93.0:7.0

配制方法:準確稱取無水醋酸鈉8.203g于1000mL水中,攪拌均勻,使之溶解,用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調pH值至6.50;準確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液930mL和乙腈70mL,混合均勻,抽濾過0.22µm濾膜;  

流動相B:水:乙腈=20.0:80.0

配制方法:準確量取水200mL和乙腈800mL,混合均勻,抽濾過0.22µm濾膜;

梯度方法:

梯度程序

流動相A 0.1mol/L醋酸鈉溶液(pH 6.50):乙睛=937

流動相B 水:乙腈=2080


T(min)                    A%                    B%

0.0                     100.0                          0.0

11                     93.0                   7.0

13.9                           88.0                    12.0

14                   85.0                           15.0

29                        66.0                          34.0

30                         0.0                    100.0

35                         0.0                    100.0

35.1                       100.0                     0.0  

45                    100.0                                           0.0

流 速1.0mL/min

柱 溫:43

波 長:254nm

進樣量:5μL

樣品制備衍生過程

精密量取對照溶液5ml,加入25ml量瓶中,加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯的乙腈溶液2.5ml1.0mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml,搖勻,室溫放置1小時后,加入50%乙腈水至刻度,搖勻,取10ml,加正己烷10ml,振搖,放置10分鐘。取下層溶液,過濾,取后續濾液,即得。

色譜圖

1、樣品衍生后

阿膠衍生物測定


2:取樣品溶液1ml50%乙腈水稀釋1倍。(由于衍生試劑濃度過大造成樣品測定過載,形成峰分叉,樣品稀釋1倍后測定)

阿膠衍生物測定

阿膠衍生物測定

阿膠衍生物測定

結論:和曦生物的MorphlingTM Amino Acid 4.6*250mm 5µm的色譜柱可以實現對阿膠衍生后的樣品進行測定。


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