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硝酸鹽還原試驗的簡單介紹
閱讀：661 發布時間：2024-4-22一、培養基用途：
以HB0277硝酸鹽肉湯為例，該培養基用于蠟樣芽孢桿菌的硝酸鹽還原試驗。
二、培養基成分及使用方法：
1. 培養基成分
2.使用方法
稱取本品9.0g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝試管，每管5mL（觀察產氣需加小倒管），121℃高壓滅菌15min。
此培養基需配套HB8282硝酸鹽還原試劑使用。
三、原理：
蛋白胨和牛肉粉提供碳源、氮源、維生素和生長因子；某些細菌可利用硝酸鹽產亞硝酸鹽、氨或氮氣。滴加硝酸鹽還原試劑后若試驗菌培養物中有亞硝酸鹽，可與乙酸、對苯氨基苯磺酸和α-萘胺反應生成紅色的N-α-苯胺偶氮苯磺酸。若試驗菌可利用硝酸鹽產亞硝酸鹽進一步轉化為氮氣，則小倒管中會有氣體囤積，判定為陽性。若試驗菌可將亞硝酸鹽轉化為氨，則滴加硝酸鹽還原試劑呈無色反應，此時需加入適量鋅粉證明培養物中是否有未被利用的硝酸鹽存在，若加入鋅粉后為無色則證明無硝酸鹽，則可判斷為陽性。試驗菌不利用硝酸鹽，滴加硝酸鹽還原試劑后為無色，加入鋅粉后變為紅色，證明培養物中有未被利用的硝酸鹽被鋅粉還原為亞硝酸鹽產生紅色反應，此時判斷為陰性。
四、實驗結果：
1、按使用方法制備培養基，接種以下質控菌株，在35±1℃需氧培養24±2h。
圖1-2 硝酸鹽還原試驗結果
a: 大腸埃希氏菌ATCC25922，b: 銅綠假單胞菌ATCC27853，
c:蠟樣芽胞桿菌CMCC63303（培養3d），d: 單增李斯特氏菌ATCC19114
五、注意事項
由于某些菌利用硝酸鹽緩慢，可延長時間培養，結果為陽性依然可判定為利用硝酸鹽陽性。