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NK細胞的培養要點

時間:2023/7/3閱讀:2156
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NK細胞(如NK-92細胞)是重要的免疫細胞,并且在體外的培養中需要特別注意以下事項:

 1. 培養基準備:使用無菌和新鮮配制的培養基,如RPMI-1640。培養基中應添加適量的IL-2,以維持細胞的生長和活力。IL-2的保存溫度一般為-20℃,解凍后放置在4℃冰箱保存。使用前預熱,使用完畢后立即放回4℃冰箱保存,不超過兩周。 

2. 細胞密度和補液:細胞應保持在適宜的密度范圍內,不宜過于密集或過稀。細胞補液周期一般為2-3天。可以交替使用半量換液和離心換液法。半量換液2-3次后,離心全部換液一次。在補液過程中,也要及時補充適量的IL-2。 

3. 觀察和處理細胞聚集物:NK-92細胞在培養過程中常常形成細胞團塊,這是正常現象。細胞團塊可以適當吹散,但不必刻意將其分散成單顆細胞。過度吹散會導致細胞損傷和細胞死亡。對于過于龐大的細胞團塊,可進行分散處理,以確保細胞的均勻生長。

 4. 細胞傳代:細胞傳代是保持細胞活力和增殖的重要步驟。傳代時,應使用適當的酶消化液,如trypsin,輕輕松弛細胞團塊,并進行細胞計數和分配。傳代后的細胞應補充適量的新鮮培養基和IL-2。 

5. 細胞凍存:對于長期保存和備份細胞,凍存是必要的。在凍存前,細胞應處于健康和活躍的狀態。推薦使用合適的凍存液(如90% FBS和10% DMSO的混合液),將細胞分裝至凍存管中,并按照標準的凍存程序進行冷凍保存。注意控制凍存速度和溫度。 

6. 細胞復蘇:細胞從凍存狀態復蘇時,應謹慎操作。將凍存管放入37℃水浴中,迅速退冰,并將細胞懸液轉移到新鮮的培養基中。注意在復蘇過程中避免過度吸吮和吹打,以減少細胞損傷。 

  NK細胞的培養需要嚴格注意培養基的配制和細胞處理的細節,以確保細胞的健康生長和活性。在培養中遵循標準的操作流程,并進行定期的細胞觀察和細胞傳代,有助于獲得高質量和可重復的實驗結果。

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