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什么是梯度PCR?

閱讀：2097 發布時間：2021-5-31

對于一個PCR反應，雖然有各種各樣的PCR儀引物設計軟件或者經驗公式計算最適的退火溫度，可是由于模版中堿基的組合千變萬化，對于特殊片斷，經驗公式得到的數據不一定能"P"出來結果，細微的變化對結果都可能產生決定性的影響，因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問題。梯度PCR的出現部分解決了一些問題——在反應過程中每個孔的溫度控制條件可以在指定范圍內按照梯度變化，根據結果，一步就可以摸索出適合的反應條件。不單退火溫度，連變性溫度和延伸溫度都可以優化——對于多種聚合酶混合酶擴增如Invitrogen、Clontech、Promega的多數高保真Taq酶來說這個非常重要，因為Taq和校正酶的最佳反應溫度可能有顯著差異，優化延伸溫度就顯得很重要。多次實驗可在一臺儀器上完成，既節省實驗時間提高效率，又節省實驗成本。檢驗地帶網對于帶梯度功能的PCR儀，需要考慮梯度模式下不同梯度管排間的溫度均勻性和準確性，還必須考慮儀器在梯度模式和標準模式下是否具有同樣的溫度特性。這種差異可能導致在梯度模式下得出的最佳條件與標準模式下單獨做的結果出現差異。這一技術保證了在梯度模式和普通模式之間可以進行可靠的信息傳遞，不會因為溫度特性不同而導致產量和特異性的變化。此外采用TCT（三組回路）技術的梯度PCR儀由于在梯度PCR模式下增加了一個加熱和冷卻的控制區域，保證了梯度溫度控制的精確性并使不同梯度管排間的溫度均勻性更好。在PCR儀上增加原位PCR模塊就可以在玻片上進行原位PCR擴增，MJ和eppendorf的PCR儀都有提供原位適配器以滿足不同需要。購買配有支持原位PCR模塊的PCR儀對從事醫學研究的工作者是很值得的，一機兩用。此外，隨著基因組高通量研究的需求的提高，各品牌都推出了多槽式高通量PCR儀，各有特長：MJ有一種一拖四，就是1個主機帶4個擴增槽，每個槽可以獨立控溫，一次可以作96x4個樣品的PCR，不過一旦出現問題4個都不能用了。ABI則在原來的9700的基礎上推出了雙384孔的基座，一次完成384x2個樣品，使得9700的功能又擴展到高通量領域而無需購買新的機器，可惜兩個384槽不能獨立控溫。

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