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hplc色譜柱老化的問題如何解決?

閱讀:3576      發(fā)布時間:2022-2-11
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  在氣相分析過程中,hplc色譜柱是氣相色譜儀的“心臟”,在組分的定性和定量分析中起著至關(guān)重要的作用。今天我們來分享一下關(guān)于hplc色譜柱老化的問題。
  色譜柱老化,簡而言之,就是通過高溫烘烤柱子,用載氣將不穩(wěn)定的固定相、可能存在的雜質(zhì)和污染物帶出柱子,恢復(fù)柱效的過程。
  需要對色譜柱進(jìn)行時效處理的條件有哪些?
  1、新購柱:對于新柱,在初次使用前,老化處理可以去除柱內(nèi)鍵合不穩(wěn)定的固定液或填充柱內(nèi)殘留的溶劑,保證新柱性能的穩(wěn)定性。
  2、對于長期閑置需要重新啟動的色譜柱,色譜柱老化可以去除色譜柱長期放置造成的污染物、氧氣和水分。并恢復(fù)柱的屬性。
  3、使用時間長或經(jīng)過復(fù)雜基質(zhì)和質(zhì)量樣品分析的色譜柱:此時主要通過老化去除色譜柱內(nèi)殘留的高沸點雜質(zhì)和污染物;另一方面,在高溫下長期使用色譜柱會導(dǎo)致固定液流失,暴露部分活性位點。通過時效處理,利用固定相的熱脹冷縮特性,使柱內(nèi)壁的活性位點再次被覆蓋。并恢復(fù)柱的屬性。
  如何操作,老化過程中需要注意哪些細(xì)節(jié)?
  1、老化溫度的選擇
  一般情況下,老化溫度可控制在方法的較高分析溫度和色譜柱恒溫上限之間。
  老化溫度也可設(shè)定為低于色譜柱恒溫上限20-30℃;或比該方法的較高分析溫度高20-30℃。
  需要注意的是,每根hplc色譜柱都有其所能承受的溫度限制,老化前需要仔細(xì)閱讀柱箱或說明書。在老化過程中,一旦超過柱溫極限,就會導(dǎo)致固定相流失,縮短使用壽命。因此,在保證去除雜質(zhì)和污染物的前提下,可以盡可能降低老化溫度。
  2、老化時間
  具體時效過程一般設(shè)置為程序加熱(緩慢升溫至設(shè)定時效溫度),如:初始溫度35℃,2-5℃/min,升溫至?xí)r效溫度,保持0.5-2h.具體老化時間可根據(jù)除雜效果確定。
  3.防止氧氣進(jìn)入柱內(nèi)
  因為在高溫下,有氧存在,固定液容易被氧化,穩(wěn)定的硅烷鍵會斷裂,造成嚴(yán)重的柱損和柱效下降。
  因此,為避免氧氣進(jìn)入色譜柱,應(yīng)注意以下幾點:
  ①將色譜柱的進(jìn)氣口連接到儀器的進(jìn)樣口。將色譜柱末端置于酒精中,取載氣觀察是否有連續(xù)氣泡。如果不是,請檢查色譜柱是否有中段斷裂、安裝和系統(tǒng)泄漏。
  ②將載氣流速設(shè)置為正常工作值,將進(jìn)樣口、柱溫箱和檢測器(如果連接到檢測器)設(shè)置為35℃或關(guān)閉儀器溫控系統(tǒng)。載氣在室溫下可用15-30分鐘,以替換儀器系統(tǒng)和色譜柱中可能存在的氧氣。
  ③確保儀器的其他接頭安裝正確并通過泄漏測試。
  4.避免污染
  一般情況下,為避免檢測器受到污染,不建議在老化過程中連接檢測器。正常操作是用實心壓環(huán)塞住檢測器下端,關(guān)閉溫度。如果連接了檢測器,對于FID檢測器,不需要點火,也不需要打開空氣和氫氣;如果是ECD探測器,應(yīng)設(shè)置吹尾,避免過多的熱量和溫度傳遞到ECD,以保證探測器內(nèi)部放射源的安全。此外,禁止使用氫氣老化色譜柱,即避免氫氣泄漏和積聚在柱溫箱中,導(dǎo)致爆炸。
  5、老化前應(yīng)進(jìn)行相關(guān)保養(yǎng)
  對于使用時間長或分析過復(fù)雜基質(zhì)和多個樣品的色譜柱,老化是為了去除一些殘留的污染物。這些污染物往往是沸點較高的化合物,它們會積聚在色譜柱的頂部,例如樣品中的蛋白質(zhì)、色素、凝膠等。為避免在hplc色譜柱柱內(nèi)污染物不能*從柱內(nèi)排出時,污染物繼續(xù)轉(zhuǎn)移到柱內(nèi),在老化柱前應(yīng)將柱子適當(dāng)剪掉一部分。另外,進(jìn)樣器襯管、石英棉和進(jìn)樣器隔板要保養(yǎng)好,以免老化過程中對色譜柱造成二次污染。綜上所述,去除污染源后,色譜柱老化是有意義的。

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