ELISA檢測    

一、實驗介紹

　　酶聯免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay（簡寫ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。

二、實驗目的與原理

　　ELISA目的是檢測血清、尿液、細胞上清等液體中特定的抗原，以達到定性判斷的目的。

　　ELISA原理即將已知的抗原或者抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術。示意圖如下：

三、實驗步驟

　　實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

　　1.將酶標板取出，分別設標準孔和樣本孔，每個標準點依次各設兩孔，每孔加入相應標準品50μL；待測樣本孔中加入待測樣本10μL，再加入樣本稀釋液40μL（樣本稀釋5倍）。（加樣順序及相應編號見excel表中相關內容！）

　　2.棄去液體，將洗液工作液按350μL/每孔注入孔內，靜置10s甩干，重復洗板5次，在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。

　　3.每孔中加入檢測抗體50μL（在使用簽10分鐘內配制），充分混勻，貼上不干膠封面，37℃溫育30分鐘。

　　4.重復步驟2。

　　5.每孔加顯色劑A 50μL，顯色劑B 50μL，振蕩混勻后，37℃避光顯色10分鐘，每孔加終止液50μL。

　　6.用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）。在反應終止后10分鐘內檢測。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。

　　7.實驗完畢后，未使用完的試劑按規定保存溫度放回冰箱保存。

四、典型數據展示

由于實驗操作條件的不同，標準曲線的OD值會有所差異。以下數據和曲線僅供參考，如下本實驗室建立的標準曲線。

五、送樣運輸要求：

　　血清、血漿或其他液體樣本：100μl檢測一個指標；

　　未經分離處理的樣本，例如全血1ml大約可分離100-200μl血清，但是必須根據客戶實際送樣情況而定，全血樣本4℃保存送檢，其余液體樣本-20℃凍存送檢。

　　組織：樣本至少0.1g（黃豆大小），最后能勻漿分離上清液500μl左右，可檢測5個指標，-20℃凍存送檢。