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技術文章

細胞遷移研實驗技術服務介紹

閱讀:112          發布時間:2024-9-19
細胞遷移


應用簡介
       遷移是腫瘤細胞轉移過程中bi不可少的環節之一。腫瘤細胞與母體瘤分離,穿越血管壁,侵襲周邊正常組織時,需要一定的運動能力。高轉移的腫瘤細胞通常具奮較強的運動性。多種物質可剌激腫瘤細胞的遷移,如腫瘤細胞分泌因子、生長因子、細胞外基質成分(FN、LN)以及一些癌轉移靶器官的代謝產物或分泌產物等生長因子對腫瘤細胞有趨化作用,可使其發生定向運動。測定方法以細胞劃痕法和Transwell小室法。
技術原理
       細胞劃痕法是簡捷測定細胞遷移運動與修復能力的方法,類似體外傷口愈合模型,在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央區域劃線,去除中央部分的細胞,然后繼續培養細胞至實驗設定的時間,取出細胞培養板,觀察周邊細胞是否生長至中央劃痕區,以此判斷細胞的生長遷移能力,實驗通常需設定正常對照組和實驗組,實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別,通過不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力,可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。
實驗方法

技術總結
【注意事項】
       1、鋪細胞最好使用6孔板,因為6空板可以保證有相當距離的平直劃痕,因為有5條定位線,與劃痕相交,這樣就有10個可固定監測點,不作重復,誤差也很小。
       2、如果連續監測24小時,需要考慮到劃痕縮小是細胞遷移和細胞繁殖共同作用的結果,而不是單純的細胞遷移。如果要單純的考慮細胞遷移,可以先用si裂霉素(1μg/ml)處理一小時,抑制細胞的分裂,這樣結果就是細胞遷移的作用了。另外,使用無血清培養基也可以降低增殖對實驗結果的影響。
       3、照片拍完之后,可以用imageJ來測量劃痕區域的像素定量比較細胞遷移的速度。
       4、雖然無血清培養可以忽略細胞增殖的影響,但是由于細胞內信號傳導系統整體性的下調節,細胞遷移的速度也會慢很多。
【常見問題】
       細胞劃痕時發現細胞沒有長滿,或是長的太滿?
       R鋪板時的數量須根據細胞的形態、增殖速度、大小進行調節,細胞較小或增殖速度慢,鋪板數量需多于6×105個細胞/孔;細胞較大或增殖速度較快則需少于6×105個細胞/孔;
       細胞鋪板時前面鋪的孔細胞密度稀后面鋪的孔細胞密度密?
       R細胞鋪板,細胞單細胞懸液混合后,鋪板過程中需要邊鋪板邊晃動管子,保證細胞在懸液中均勻分布;
       拍出來的照片背景顏色不一或亮度不一?
       R在拍照前進行白平衡;固定曝光時間。作為腫瘤細胞轉移研究中的重要角色,這個任重道遠的過程需要很多bi不可少的步驟,準確易行也是對實驗的要求之一。


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