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技術文章

細胞自噬科研實驗技術服務介紹

閱讀:199          發布時間:2024-9-18
細胞自噬


應用簡介
       自噬與多種生理反應相關,比如腫瘤,炎癥,免疫應答,氧化應激等。通常情況下,對于自噬的研究,除了發生的機制本身外,更多的是將自噬與各種生命活動或者疾病結合起來。比如研究自噬在腫瘤的發生發展,炎癥反應,氧化應激等不同生物學功能的作用。
技術原理
       自噬是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質或細胞器,最終將吞食物在溶酶體內降解的過程。自噬體(自噬體)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結構,內含細胞質,長壽蛋白質和異常蛋白聚集物,損傷或多余細胞器如線粒體,粗面內質網和微體,病毒和細菌等。
自噬過程:
       1、細胞接受自噬誘導信號后,在胞漿的某處形成一個小的類似"脂質體"樣的膜結構,然后不斷擴張,被稱為Phagophore。
       2、Phagophore不斷延伸,將胞漿中的任何成分,全部攬入,然后"收口",成為密閉的球狀的autophagosome,即"自噬體"。
       3、自噬體形成后,可與細胞內吞的吞噬泡、吞飲泡和內體融合(這種情況不是必然要發生的)。
4、自噬體與溶酶體融合形成autolysosome,期間自噬體的內膜被溶酶體酶降解,2者的內容物合為一體,自噬體中的"貨物"也被降解,產物(氨基酸、脂肪酸等)被輸送到胞漿中,供細胞重新利用,而殘渣或被排出細胞外或滯留在胞漿中。
實驗方法

技術總結
       一、自噬誘導劑
       1、BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin:模擬內質網應激
       2、Carbamazepine/L-690,330/LithiumChloride(氯化鋰):IMPase抑制劑(即Inositolmonophosphatase,肌醇單磷酸酶)
       3、Earle's平衡鹽溶液:制造饑餓
       4、N-Acetyl-D-sphingosine(C2-ceramide):ClassIPI3KPathway抑制劑
       5、Rapamycin:mTOR抑制劑
       6、XestosponginB/C:IP3R阻滯劑
       二、自噬抑制劑
       1、3-Methyladenine(3-MA):(ClassIIIPI3K)hVps34抑制劑
       2、BafilomycinA1:質子泵抑制劑
       3、Hydroxychloroquine(羥氯喹):Lysosomallumenalkalizer(溶酶體腔堿化劑)
除了選用上述工具藥外,一般還需結合遺傳學技術對自噬相關基因進行干預:包括反義RNA干擾技術(Knockdown)、突變株篩選、外源基因導入等。

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