近年來，在質量控制檢測方面，制藥技術有了重大改進和進步。其中一項檢測是鱟試劑檢測水和最終藥品中的細菌內毒素，內毒素是一種有害的熱原。傳統的光度法鱟試劑檢測——包括用于動態濁度法和動態顯色法的96孔板檢測——耗時且需要大量手動時間。現在，通過使用微流控技術，可以顯著減少液體處理和手動時間，同時減少鱟試劑和樣品量，并且保證合規性。
傳統的鱟試劑檢測使用96孔板，每個孔具有特定的形狀和吸光度的路徑長度。96孔板的路徑長度根據制造商或廠商略有不同。這是因為平底96孔板上的孔通常是截頭圓錐體，便于從模具中脫模。1
由于孔的深度和形狀，鱟試劑制造商規定了每個孔需要多少樣品量和鱟試劑，以保持內毒素檢測的1:1比例。動力學內毒素測定依賴于光密度（OD）變化和內毒素濃度之間的反比關系。OD是“用分光光度計測定的有機分子懸浮液或溶液在特定波長下吸收的光量"。2
樣品與鱟試劑的比例（1:1）非常重要。大多數鱟試劑制造商建議96孔板讀數器和試管讀取器使用100 µL樣品至100 µL鱟試劑。有些鱟試劑使用的樣品和鱟試劑少于100 µL，這些鱟試劑通常在具有較小孔的微孔板中運行。然而，1:1的比例仍然保持不變。多年來，已證明這種1:1的比例可以準確地得出內毒素結果。使用100 µL的樣品和鱟試劑不是法規或藥典的要求。相反，它是根據孔板或試管讀取器的孔徑大小、所需的路徑長度和達到光密度的吸光度，給出使用多少體積（樣品和鱟試劑）才能達到1:1比例的一項建議。
近年來，鱟試劑檢測出現了新的創新，如Sievers® Eclipse細菌內毒素檢測儀。Eclipse利用微流控技術和向心力將小體積的液體準確地輸送到微孔板上的特定部分，從而大大減少了所需的試劑量并簡化了設置。30多年來，微流控一直是一個蓬勃發展的研究領域，因為它能夠滿足準確、經濟高效、可靠和靈敏的化學和生物分析需求，而這正是內毒素分析所需要的。
向心微流控用于鱟試劑測試
Eclipse微孔板在五個區域中嵌入了不同濃度的標準品可制成標準曲線，每個濃度的標準品都有陰性對照。有21個樣品區用戶可以在一個板上運行多達21個樣品，類似于96孔板讀取器。每個樣品區都含有陽性產品對照的內毒素。
由于微流體需要較小的反應體積，但不會改變生物化學結構和特性，因此，將Eclipse微流控技術設計為使用比典型方法更少的鱟試劑，同時保證合規性。Eclipse的光密度是用比爾定律計算出來的。比爾定律，也稱為比爾-朗伯定律，指出“化學溶液的濃度與其對光的吸收成正比。"3由于微流體的性質，包括流體通道和樣品/鱟試劑室，Eclipse只需要1 mL鱟試劑，并確保每次測定的樣品與鱟試劑比例為1:1。
在Eclipse的整個開發過程中進行了廣泛的測試，以確保與96孔板讀取器的性能相當。《美國藥典》在<1225>一章中概述了驗證分析方法時需要考慮的參數。Eclipse的系統性能是通過測定USP <1225>中列出的不同參數來評估的。
多年來，Sievers分析儀對來自多家廠商的多個鱟試劑批次進行了測試。除了鱟試劑水外，我們還在Eclipse和96孔板讀取器上運行了藥品樣品。數據顯示，Eclipse的性能與傳統的微孔板讀取器相當。總結即為，Eclipse使用符合藥典的動態顯色鱟試劑進行合規的細菌內毒素檢測。根據USP <1225>的驗證數據表明，Eclipse相當于96孔板讀取器。
原文英文版刊登于《American Pharmaceutical Review》2023年5-6月刊，本文有所修改。
參考文獻
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