化工儀器網
技術文章
PCR系列?動物基因組DNA快速提取試劑盒
閱讀：862 發布時間：2023-4-11動物基因組DNA快速提取試劑盒適合于從新鮮或凍存組織，如培養的哺乳動物細胞，血液，唾液，毛發（含羽毛），鼠尾及鼠耳等動物組織中快速提取基因組DNA，用于后續的基因 型鑒定等PCR分析檢測。
操作步驟：
提前準備可設置恒定溫度為 55℃和 95℃的熱蓋金屬浴或者PCR儀；提取試劑A在 2~8℃條件下會出現絮狀（結晶）沉淀，為正常現象，試劑平衡至室溫后可自行消失，不影響使用；使用前取出所有試劑于室溫下平衡，顛倒混勻后備用。
1. 消化液的配制：按照樣本數量n配制消化液，具體配制方法如下：分別吸取（n× 50µL提取試劑A+n× 2.5µL提取試劑B）加入潔凈離心管中，移液器吹吸充分混勻，分裝至 0.2mL PCR（離心管）中，每孔 52µL（如樣本過多，可提前預制，于 2~8℃短暫保存，2 小時內使用）。
2. 不同組織樣本基因組DNA的提取：
培養的哺乳動物細胞：將收集到的細胞除去培養液，吸取消化液充分吹吸重懸細胞后，轉移至原消化液孔中。
血液/唾液：吸取不超過 10µL的血液或者唾液加入消化液中，移液器吹吸混勻。
毛發（含羽毛）：實驗前用 75%的乙醇沖洗剪刀和鑷子。剪除毛發（含羽毛）的多余部分，僅需保留毛發的根部（羽軸中羽根）區域，并將其盡可能剪碎至消化液中，移液器吹吸混勻。鼠尾/鼠耳：實驗前用 75%的乙醇沖洗剪刀和鑷子。剪取不超過 0.5cm的小鼠尾尖或耳尖，并將其盡可能剪碎至消化液中，移液器吹吸混勻（一般情況下，重量約為 10mg的 0.5cm長的鼠尾或鼠耳剛好能浸沒在含有 50μL消化液的PCR管中）。對于新鮮的鼠尾或鼠耳，建議盡量在剪下鼠尾或鼠耳后 30 分鐘內進行基因組DNA提取，否則宜盡快冷凍存放。
3. 將樣本置于 55℃熱蓋金屬浴或者PCR儀，孵育 10 分鐘。
4. 將樣本置于 95℃熱蓋金屬浴或者PCR儀，孵育 5 分鐘（孵育結束后，組織未消化屬于正常現象，不會影響試劑盒的檢測效果）。
5. 將上述提取樣本置于-20℃冷卻 5 分鐘，或 4℃冷卻 15 分鐘以上，以避免氣溶膠污染，瞬時離心后取上清立即進行PCR檢測（若需長期保存樣本，應將未消化的組織去除或將提取物轉移到新的離心管中。大部分情況下，提取物 4℃能保存至少 1 個月，-20℃至少能 保存一年）。