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Mich TLX DNA-seg kit (illumina Compatible) 是為 illumina 平臺設計的 DNA 文庫準備試劑盒,適用于起始量 1 ng-200 ng 的 DNA 樣本，試劑盒經過精心設計和優化，能夠快速構建文庫(2.5-3.5小時)，有高效的文庫轉化率與擴增效率，已經經過多樣本驗證可獲得優異的文庫與測序數據，可用于石蠟包埋組織 DNA 樣本建庫。試劑盒包含了 DNA 片段化和末端修復加 A尾的預混液、連接預混液、高保真擴增預混液、短接頭和含有 INDEX 的 PCR 引物(可以根據客戶要求進行選配)。
(注意: 本試劑盒不可直接用不帶 INDEX 的引物進行 PCR 反應)。
| 產品貨號 | 名稱 | 規格 |
| NGS 0602-8 | MICH TLX DNA-seq kit (illumina Compatible) | 8 rxns |
| NGS 0602-24 | MICH TLX DNA-seq kit (illumina Compatible) | 24 rxns |
| NGS 0602-96 | MICH TLX DNA-seq kit (illumina Compatible) | 96 rxns |
| 名稱 | 體積(NGS 0602-8) | 體積(NGS 0602-24) | 體積(NGS 0602-96) |
| TLX Buffer Mix | 38 μL | 112 μL | 448 μL |
| TLX Enzyme Mix | 30 μL | 89 μL | 356 μL |
| TLX ligase Enzyme | 20 μL | 56 μL | 224 μL |
| TLX ligase Buffer | 76 μL | 224 μL | 896 μL |
| TLX Adapter for ILM | 20 μL | 56 μL | 224 μL |
| PCR Master Mix | 96 μL | 280 μL | 1120 μL |
使用流程
請穿實驗服并戴一次性手套進行實驗。
使用前請將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。
混勻時請輕輕吹打或輕輕振蕩，劇烈振蕩可能會造成文庫產出下降。
為避免樣品交叉污染，推薦使用帶濾芯的一次性槍頭。
推薦在帶熱蓋的 PCR 儀中進行各步驟反應，使用前應預熱 PCR 儀至反應溫度附近請在潔凈的實驗環境下實驗，避免污染。
TLX Adapter for ILM 采用短接頭模式。
接頭濃度: 15 uM；直接用于相應建庫試劑盒連接體系里即可。
-20°C保存，使用前提前融化，盡量低溫融化，避免在超過 30°的環境中融化。
建庫推薦使用量: 常規 DNA投入量 100-200 ng,2uL/rxns; 其他 DNA 投入量需要適當調整接頭使用量。
DNA 片段選擇步驟可在接頭連接后或文庫擴增后進行。
當Input DNA質量> 50 ng，建議在接頭連接后分選；如Input DNA 質量<50 ng，可在文庫擴增后進行分選。
TLX Ligase Buffer 包含高濃度的 PEG，對雙輪磁珠分選產生顯著影響。因此，當在接頭連接后進行片段選擇，須先進行純化步驟，再進行雙輪分選步驟，如在文庫擴增后進行片段選擇，可直接進行雙輪磁珠分選步驟。
磁珠使用前應先平衡至室溫，并混勻再使用，否則會導致得率下降。
80%乙醇應現用現配，否則將影響回收效率。
6進行片段選擇時，初始樣品體積應盡量> 100 uL，初始樣本體積越大，片段選擇效果越好。
通常情況下，構建好的文庫可通過長度分布檢測和濃度檢測來進行質量評價。
文庫濃度檢測可使用：基于雙鏈 DNA熒光染料的方法，如Qubit或 gPCR 絕對定量的方法。
文庫長度分布檢測，可通過 Agilent Bioanalvzer 2100 等基于毛細管電泳或微控流原理的設備進行檢測。
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