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CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是研究DNA與蛋白互作的新技術。與ChIP-Seq相比，CUT&Tag不需要甲醛交聯和免疫共沉淀的過程，而是通過靶蛋白的抗體和Protein A的介導，使Protein A融合的Tn5轉座酶靶向并切割DNA，同時在序列兩端加上測序接頭，經PCR擴增后形成高通量測序文庫。
技術流程
細胞與ConA beads結合——細胞滲透性處理——一抗與目的蛋白特異性結合——二抗結合一抗放大信號——加入pA-Tn5與抗體結合——通過Mg2+激活轉座體，片段化目的蛋白結合的DNA，并加上接頭序列——DNA提取與擴增-高通量測序
| 客戶提供材料 | 交付結果 |
凍存細胞：細胞數>10萬 凍存組織：組織量>40 mg 一抗（請使用ChIP級別的一抗，提供未稀釋的抗體原液， 送樣前請將抗體的說明書發給我們，以便安排后續實驗） | 實驗過程圖 高通量測序原始數據 生物信息學分析結果 |
使用CUT&Tag，鑒定H3K27me3在染色質水平上的peaks。與ChIP-seq相比，在相同Reads條件下，兩者的Peaks一致，并且CUT&Tag的信噪比更高、背景更低。
參考文獻
Kaya-Okur HS, Wu SJ, Codomo CA, Pledger ES, Bryson TD, Henikoff JG, Ahmad K, Henikoff S. CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells. Nat Commun. 2019 Apr 29;10(1):1930. doi: 10.1038/s41467-019-09982-5.
技術對比
| CUT&Tag，DAP-seq，ChIP-seq技術對比 | |||
| 技術名稱 | CUT&Tag | DAP-seq | ChIP-seq |
| 實驗模式 | 體內 | 體外 | 體內 |
| 是否需要特異性抗體 | 是 | 否 | 是 |
| 樣本適用性 | 對細胞活性要求高，不兼容冷凍樣本，能夠對極少量樣品進行分析 | 各種組織器官，新鮮組織、凍存組織皆可 | 各種組織器官，新鮮組織、凍存組織皆可 |
| 信噪比 | 背景噪音低，所需測序深度少 | 噪音高，所需測序量相對較多 | 噪音高，所需測序量相對較多 |
我們可為您提供CUT&Tag（DNA-蛋白互作研究）技術服務，歡迎咨詢！
更多技術服務：
DNA親和純化測序（DAP-seq）
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酵母單雜交技術 (Yeast One-Hybrid)
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Halo pull down
檢測已知蛋白質之間的相互作用，鑒定與已知蛋白相互作用的未知蛋白。
重組蛋白表達
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