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瑞典SVEA色譜柱在色譜操作過(guò)程中需要注意哪些問(wèn)題

閱讀:846        發(fā)布時(shí)間:2019-11-19
   瑞典SVEA色譜柱在色譜操作過(guò)程中,需要注意下列問(wèn)題,以維護(hù)色譜柱。
  1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
 
  2、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然,流?dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理。
 
  3、一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
 
  4、選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時(shí),預(yù)柱為硅膠,可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解,壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)。
 
  5、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
 
  6、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗瑞典SVEA色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí),對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡,每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50~75ml。
 
  7、避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相;如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相,應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈。
 
  8、進(jìn)樣樣品要提純;
 
  9、嚴(yán)格控制進(jìn)樣量,不要超載。
 
  10、每天分析測(cè)定結(jié)束后,都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)清洗柱,用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí),使用完后應(yīng)用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道,不宜長(zhǎng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用,應(yīng)每隔4~5天開(kāi)機(jī)沖洗15分鐘。
 
  11、大多數(shù)瑞典SVEA色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5,盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍。
 
  12、按說(shuō)明書(shū)保存色譜柱,禁止將緩沖液留在柱內(nèi)過(guò)夜,注意反相柱不能用純水長(zhǎng)時(shí)間沖。
 
  13、不建議拆開(kāi)柱子,自己更換填料。

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