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realtimeprimers qPCR 預混液
  • realtimeprimers  qPCR 預混液
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更新時間:2023-12-08 18:19:06瀏覽次數(shù):936評價

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realtimeprimers qPCR 預混液
用于實時 PCR 的 AzuraQuant™ Green 和 Probe Fast qPCR 主混合物 實時
realtimeprimers  qPCR 預混液
用于實時 PCR 的 AzuraQuant™ Green 和 Probe Fast qPCR 主混合物 實時

PCR 引物酶:AzuraQuant™ Green Fast qPCR Mix 是一種即用型 2x 主混合物,用于實時定量 PCR 測定,其中插入染料基于檢測提供了擴增后熔解曲線的選項。該系統(tǒng)包含 Vivid-Green™ 染料,這是一種新型熒光 DNA 結(jié)合染料,與 SYBR® Green 相比,它在與雙鏈 DNA 結(jié)合時產(chǎn)生最小的 PCR 抑制和更強的熒光。

AzuraQuant™ Green Fast qPCR Mix 包含 Azura HS Taq DNA 聚合酶、優(yōu)化的緩沖液化學物質(zhì)和專有的 DNA 結(jié)合染料,可提供強大的實時 PCR 功能,具有更早的定量周期值 (Ct) 和廣泛的檢測,從而提高靈敏度、速度、可靠性和再現(xiàn)性。 AzuraQuant™ Green Fast qPCR Mix 幾乎不需要任何優(yōu)化,可用于定量任何 DNA 模板,包括 cDNA、基因組 DNA 和低拷貝病毒靶標。

AzuraQuant™ Probe Fast qPCR Mix 是一種即用型 2x 主混合物,用于實時定量 PCR 測定,專為探針檢測技術(shù)而配制,包括 TaqMan®、Scorpions® 和分子信標探針。

AzuraQuant™ Green Fast qPCR Mix Fluor
AzuraQuant™ Green Fast qPCR Mix LoRox
AzuraQuant™ Green Fast qPCR Mix HiRox
AzuraQuant™ Probe Fast qPCR Mix - No Rox
AzuraQuant™ Probe Fast qPCR Mix LoRox
AzuraQuant™ Probe Fast qPCR Mix HiRox
AzuraQuant Green 1-Step qRT-PCR Kit Fluor LoRox
AzuraQuant Green 1-Step qRT-PCR Kit Fluor HiRox


概述 - 定量“實時"PCR 或 qPCR

定量實時 PCR 改變了我們測量核酸濃度的能力,并且是驗證微陣列分析和其他基因組技術(shù)生成的表達數(shù)據(jù)的重要一步。實時 qPCR 儀器的開發(fā)促進了這一點,該儀器可測量反應每個步驟或“實時"產(chǎn)生的 qPCR 產(chǎn)物的量。 SYBR green 因其相對簡單和可靠而成為目前流行的實時 PCR 方法。在實時 PCR 技術(shù)發(fā)展之前,定量測量需要設置多個 PCR 反應,以便在擴增的線性階段捕獲 qPCR 產(chǎn)物。然后通過凝膠電泳或 HPLC 進行 PCR 產(chǎn)物的分離和定量。這些實驗非常費力,并且實現(xiàn)正確定量所需的操作次數(shù)增加了引入錯誤的可能性。因此,能夠在每個熱循環(huán)測量 PCR 產(chǎn)物的實時 PCR 儀器的開發(fā)提高了定量 PCR 的簡便性、準確性和重現(xiàn)性。由于實時 PCR 的發(fā)現(xiàn),出現(xiàn)了多種應用。其中包括 1) 通過微陣列分析或下一代測序 (NGS) 獲得的基因表達數(shù)據(jù)的驗證,2) DNA 拷貝數(shù)的測量,3) 病毒顆粒和潛在致命微生物的檢測和定量,4) 突變/SNP 分析,以及5)miRNA表達。實時 PCR 儀器的開發(fā)可以在每個熱循環(huán)中測量 PCR 產(chǎn)物,從而提高了定量 PCR 的簡便性、準確性和重現(xiàn)性。由于實時 PCR 的發(fā)現(xiàn),出現(xiàn)了多種應用。其中包括 1) 通過微陣列分析或下一代測序 (NGS) 獲得的基因表達數(shù)據(jù)的驗證,2) DNA 拷貝數(shù)的測量,3) 病毒顆粒和潛在致命微生物的檢測和定量,4) 突變/SNP 分析,以及5)miRNA表達。實時 PCR 儀器的開發(fā)可以在每個熱循環(huán)中測量 PCR 產(chǎn)物,從而提高了定量 PCR 的簡便性、準確性和重現(xiàn)性。由于實時 PCR 的發(fā)現(xiàn),出現(xiàn)了多種應用。其中包括 1) 通過微陣列分析或下一代測序 (NGS) 獲得的基因表達數(shù)據(jù)的驗證,2) DNA 拷貝數(shù)的測量,3) 病毒顆粒和潛在致命微生物的檢測和定量,4) 突變/SNP 分析,以及5)miRNA表達。其中包括 1) 通過微陣列分析或下一代測序 (NGS) 獲得的基因表達數(shù)據(jù)的驗證,2) DNA 拷貝數(shù)的測量,3) 病毒顆粒和潛在致命微生物的檢測和定量,4) 突變/SNP 分析,以及5)miRNA表達。其中包括 1) 通過微陣列分析或下一代測序 (NGS) 獲得的基因表達數(shù)據(jù)的驗證,2) DNA 拷貝數(shù)的測量,3) 病毒顆粒和潛在致命微生物的檢測和定量,4) 突變/SNP 分析,以及5)miRNA表達。

一般來說,實時 PCR 方案與標準 PCR 反應類似。同樣的問題也適用于生產(chǎn)干凈的模板、設計引物和優(yōu)化反應條件。主要區(qū)別在于加入了 SYBR green 等嵌入劑或使用熒光引物來檢測 PCR 產(chǎn)物。在典型的反應中,qPCR 產(chǎn)物的產(chǎn)生呈指數(shù)級增長。由于需要幾個循環(huán)才能輕松檢測到足夠的產(chǎn)物,因此熒光與循環(huán)數(shù)的圖呈現(xiàn) S 形外觀。在稍后的循環(huán)中,反應底物耗盡,qPCR 產(chǎn)物不再加倍,并且曲線開始變平。曲線上熒光量開始快速增加的點,通常比基線高幾個標準差,稱為閾值循環(huán)(Ct 值)。 Ct 與模板的關(guān)系圖是線性的,因此比較多個反應之間的 Ct 值可以計算出目標核酸的濃度。這條線的斜率提供了 qPCR 效率的衡量標準。

PCR產(chǎn)物可通過生成標準曲線來定量或相對于對照基因進行定量。基于標準曲線的實時PCR定量可以利用質(zhì)粒DNA或其他形式的DNA,其中每個標準的絕對濃度是已知的。然而,必須確保標準品的 PCR 效率與“未知"樣品的 PCR 效率相同。在某些情況下,從純化的靶標中進行 PCR 比用復雜的核酸混合物觀察到的效率更高。相對定量方法稍微簡單一些,因為它需要測量管家或?qū)φ栈蛞允鼓繕嘶虻谋磉_標準化。然而,選擇適當?shù)目刂苹蚩赡軙饐栴},因為它們不一定在所有未知樣本中均等表達。這可以通過對一組管家基因進行標準化測量來避免,以避免這種變異性問題。

進行實時 PCR 的一個關(guān)鍵方面是從高純度的模板開始。在處理某些生物樣品時,這可能具有挑戰(zhàn)性。幸運的是,已經(jīng)開發(fā)了許多商業(yè)產(chǎn)品來促進高純度核酸的分離。去除污染性苯酚和不需要的 DNA 是需要考慮的步驟。對于基因表達研究,必須使用高純度試劑并多次重復進行逆轉(zhuǎn)錄,因為此步驟可能會引入模板復制的變異性。逆轉(zhuǎn)錄可以在實時PCR之前進行,或者可以并入擴增程序中。

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