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上海牧榮生物科技有限公司

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OptiVitro® T細胞無血清培養基介紹

閱讀:1275      發布時間:2023-9-8
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OptiVitro® T細胞無血清培養基

? 無血清,無異種成分,無外源生長因子
? 支持T細胞的快速增殖和高密度培養,可用于大規模工藝流程
? 提供瓶裝&袋裝兩種形式,便于生產規模擴大和商業化開發
? 適合于多種激活方法,可支持較長周期的穩定培養(>14天)
? 自主研發,供貨穩定,可提供定制化服務(配方優化等)
? 按照GMP標準生產和管理, 完成FDA DMF備案

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應用:適合用于擴增人外周血單個核細胞(PBMC)中的 T 細胞,也適合于 T 細胞的重激活擴增培養。應用于T細胞療法開發,如CAR-T、TCR-T、TIL等。

  • 常見問題

    1. 組分:
    本產品每1L基礎培養基配發8mL添加組分,添加組分不是ICSR或者血替,化學成分明確,可放心使用,必須配成全培養基后再使用;——可以提供成分說明及TSE/BSE的申明。
    2. T細胞激活方式:
    使用本產品,可根據說明書用抗體包板方式進行激活,也可購買商業抗體偶聯磁珠進行激活,本產品同樣支持磁珠激活。
    3. 活率:
    直接培養PBMC,D5后活率可達90%以上,從PBMC中分選出T細胞,則D3開始活率可達到90%以上,D7后活率均可達到95%以上;如果轉導CAR,轉導當天活率顯著下降,為正常現象,繼續培養活率會持續上升。
    4. 培養方式:
    使用本產品,比較推薦的培養方式是D0天激活,D3、D5、D7補充培養液將細胞密度調整到0.5-1x10^6cells/ml,D7后可選擇2天或3天補一次液。
    5. T細胞擴增速度:
    T細胞的擴增在D3-D9速度較快,基本平穩,D9細胞擴增倍數一般可以達到200倍以上。D9后細胞擴增速度逐漸減緩,激活PBMC中的T細胞,最多可培養20天。
    6. 高密度培養:
    靜置培養,密度可達5-6x10^6 cells/ml,搖瓶培養或其他震蕩培養方式,密度可達10x10^6 cells/ml以上。
    7. CD4/CD8比例調節:
    使用本產品并且用磁珠激活,CD4比例較高,用抗體包板激活則CD8比例較高,可以通過改變激活方式、改變抗體包板濃度,調節CD4/CD8比例。
    8. T細胞亞型分群:
    Tn為初始T細胞,Tcm為中央記憶型T細胞,Tem為激活的Tcm,Tef為效應T細胞,分群比例隨著細胞培養的時間而變化。不同客戶對分群的要求可能不同,且不同激活方式、細胞因子的選擇以及濃度,對分群影響很大,建議客戶自行測試。
    9. T細胞轉導:
    根據客戶反饋測試數據,本產品陽性率可達到50%左右,但是不同客戶使用的工藝不同,可能導致陽性率有變化。CAR慢病毒轉導,可使用polybrene輔助轉導,逆轉錄病毒轉導可使用retronectin輔助轉導,也有許多新型輔助因子可提高轉導效率;采用離心轉導的方式可提高轉導效率。
    10. T細胞生物反應器培養:
    靜置培養后D5-D7開始在反應器中培養,在達到目標體積之前,可以2-3天補液細胞密度調整到0.5-1x10^6 cells/ml,到達目標體積后可以采取部分灌流策略。



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