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x-alpha-gal簡介

閱讀:1755      發布時間:2023-8-22
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X- α -Gal 是一種顯色底物,可用于證明α-半乳糖苷酶活性。 Glycosynth 以具有競爭力的價格提供高純度 (>98%) 的產品。

X- -Gal 和酵母雙雜交篩選

酵母雙雜交篩選是一種檢測體內 蛋白質-蛋白質相互作用的基因測定該方法由 Stan Fields 教授及其同事 (1) 開發,可用于研究兩種已知蛋白質的相互作用(例如定義對相互作用至關重要的結構域或氨基酸)。另一個重要的應用是
通過篩選文庫來鑒定以前未知的特定蛋白質的結合配偶體


通過激活報告基因轉錄的能力來選擇陽性克隆,使營養缺陷型酵母雙雜交菌株能夠在營養選擇性培養基上生長。大多數雙雜交方法還使用大腸桿菌 lacZ基因作為第二個報告基因。通常,在第二次篩選中,通過耗時的濾膜提升測定法來測定選擇平板上生長的菌落的報告基因lacZ的激活情況。或者,在產生α-半乳糖苷酶的酵母菌株中,顯色底物 X- a -Gal 可用于測定GAL4-直接基于營養選擇板的兩種雜交相互作用 (2)。

X- a -Gal 是 β-半乳糖苷酶(也稱為蜜二糖酶或 α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶,EC 3.2.1.22)的顯色底物這種
酶使酵母能夠在生長或發酵過程中使用二糖蜜二糖作為碳源。在釀酒酵母中,這種 酶由MEL1基因 編碼,該基因受多個 GAL基因的調節。該酶響應GAL4 激活而分泌,導致 X- a水解- 培養基中的半乳糖導致酵母菌落呈現藍色。該報告系統的一大優點是它消除了對β-半乳糖苷酶過濾提升測定的需要,并且結果可以立即在選擇板上看到。



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