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上海牧榮生物科技有限公司

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HitHunter® cAMP 檢測試劑盒手冊簡介

閱讀:808      發布時間:2023-06-30
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HitHunter cAMP 檢測小分子試劑盒提供了一種穩健、高靈敏度且易于使用的檢測方法,用于根據細胞中 3'-5'-環單磷酸腺苷 (cAMP) 的產生來監測 G 蛋白偶聯受體 (GPCR) 的激活。該試劑盒非常適合篩選和分析小分子。對于測試生物制劑樣品(例如血清或血漿中的粗制生物樣品、純化或未純化的抗體[抗配體或抗受體]以及雜交瘤上清液),我們建議使用專為生物制劑設計的 HitHunter cAMP Assay for Biologics和大分子應用。其他來源的細胞系也與 HitHunter cAMP 檢測兼容。


技術原理
配體結合后的GPCR激活啟動了一系列的第二信使級聯,從而導致細胞反應。該信號傳導涉及一種被稱為腺苷酸環化酶的膜結合酶。Gαs -和Gαi -偶聯受體分別通過抑制或刺激腺苷酸環化酶來調節cAMP。在HitHunter cAMP實驗中,過表達GPCRs的細胞利用GPCR的自然偶聯狀態來監測Gα的激活s -和Gαi -耦合受體。在配體刺激后,通過使用基于酶片段互補(EFC)技術的同質(無洗滌)、信號獲得競爭性免疫分析法測量細胞cAMP水平來監測GPCR的功能狀態。


GPCR cAMP路徑

image.png



在該實驗中,來自細胞的cAMP和ED標記的cAMP(ED-cAMP)競爭抗cAMP抗體(Ab)結合位點。抗體結合的ED-cAMP不能與EA互補,但未結合的ED-cAMP可以自由地補充EA形成活性酶,隨后產生發光信號。所產生的信號量與細胞中cAMP的信號量
成正比。HitHunter cAMP分析EFC技術使用了一種β-半乳糖苷酶(β-gal)酶,它被分成兩個片段,酶供體(ED)和酶受體(EA)。這些片段獨立地沒有β -gal活性;然而,在溶液中,它們迅速補充形成一個活性的β -gal酶。HitHunter的cAMP檢測試劑盒提供了一種強大的、高靈敏度的、易于使用的、基于細胞的功能檢測方法,通過cAMP的產生來研究GPCR的活性。該試劑盒包含了檢測表達Gα的cAMPHunter™細胞中cAMP所需的所有試劑s -和Gαi由小分子配體誘導的-偶聯受體。該柔性檢測系統已被設計用于96孔和384孔板格式的激動劑或拮抗劑模式。


提供商

上海牧榮生物科技有限公司

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