StarCHO Medium全新CHO細胞化學成分確定培養基奧浦邁現貨

StarCHO 是專為 CHO 細胞設計開發的全新化學成分確定基礎培養基，不含水解物、蛋白及任何動物來源，適用于常見中國倉鼠卵巢（CHO）細胞（CHOZN、CHO-K1、CHO DG44 、CHO-S 等）的高密度懸浮培養，可實現重組蛋白的高水平表達。StarCHO 基礎培養基與全新高性能補料 StarCHO Feed 及超濃縮補料CDFS36聯用，可實現更高水平的蛋白表達和質量。

應用范圍 

StarCHO 可應用于 CHO 細胞復蘇、傳代以及高密度流加培養。該基礎培養基適用于科研和基于細胞培養的大規模生物制品的生產，但不可直接用于人體或作為藥物使用。 

儲存：2~8℃冷藏，干燥避光保存 

運輸：常溫（液體）、冷藏（干粉）

液體培養基配制方法 

1. 取潔凈的配制容器，建議一次性配制體積不低于 1L； 

2. 加入最終配制體積 90%的超純水或注射用水，水溫控制在 25~35?C； 

3. 稱量 20.45 g/L 干粉培養基，緩慢加入水中攪拌 10 分鐘； 

4. 稱量 2.22 g/L 碳酸(空格)氫鈉，加入水中攪拌；

5. 緩慢加入 5N NaOH 調節 pH 到 8.3-8.5，攪拌 30 分鐘，此時應完(空格)全溶解； 

6. 緩慢加入 5N HCl 將 pH 調回至 7.0； 

7. 定容到最終配液體積，繼續攪拌 5 分鐘，測 pH，用 5N NaOH 或 5N HCl 將 pH 調回至7.0；

8. 取樣測滲透壓，加入 NaCl 調節滲透壓至 290±15 mOsm/kg（滲透壓計算公式：NaCl 添加量（g）=配液體積（L）*（290-檢測值）/31.5）；

9. 繼續攪拌 10 分鐘，無菌過濾到合適容器，2~8℃避光保存。

StarCHO Medium全新CHO細胞化學成分確定培養基奧浦邁現貨

培養條件 

溫度 37℃，濕度 80%，5~8%CO2 

搖床設置：轉速 110-150rpm（振幅 50mm）

細胞復蘇 

1. 在 37℃水浴中快速（＜2min）融化冷凍的細胞； 

2. 將冷凍管中的細胞液全部轉移到 125ml 含有 30ml 預溫過的 StarCHO 培養基的搖瓶中；

3. 放入 37℃，5~8% CO2，轉速 110~130rpm（振幅 50mm），濕度 80%的搖床中培養；

4. 細胞至少傳代 2 次，待其完(空格)全復蘇，細胞倍增時間（Population Doubling Time，PDT）穩定后，可按計劃進行后續操作。

細胞傳代 

1. 將 StarCHO 培養基放入 37℃條件下預熱 20-30min；

2. 取細胞密度≥1×10 6cells/ml、活率≥90%、處于對數生長期中期的細胞進行傳代；

3. 按接種密度為 0.5×10 6 ~ 1.0×10 6cells/L 的最終傳代體積，計算所需種子液量；

4. 無菌轉移所需量的種子液，添加至含所需體積的已預熱的 StarCHO 培養基的搖瓶中；

5. 將搖瓶放入溫度 37℃，濕度 80%，轉速 110~150rpm（振幅 50mm），5%~8%CO2的細胞培養搖床中進行培養； 

6. 每 2~3 天用新鮮的培養基按上述步驟進行傳代培養。

細胞馴化 

直接接種法 

1. 對于可以直接接種的細胞，可以從無血清培養基中直接接種到 StarCHO 培養基中，接種密度參考傳代步驟，并需要依據具體情況而定；

2. 繼續傳代細胞，直到細胞穩定生長； 

3. 傳代幾次后，細胞密度在接種的 3~4 天內達到 2×10 6cells/ml 及以上、細胞活率＞90%，且倍增時間穩定，此時可以認為細胞已被馴化成功。

梯度馴化法

1. 對于傳統的生長在 5~10%血清或無血清的細胞，采用梯度馴化法，接種密度 3×10 5~4×10 5cells/ml；

2. 監測細胞生長情況，直到細胞密度達到≥2×10 6cells/ml； 

3. 用 StarCHO 培養基：原始培養基=25:75 的比例稀釋細胞。直到這個比例的培養基細胞生長良好，再進一步稀釋培養。

4. 在完(空格)全使用 StarCHO 培養基接種 3~4 天之后，活細胞計數應該至少達到 2×10 6cells/ml，細胞活性≥85%。此時，細胞已經馴化到 StarCHO 培養基中。

細胞凍存 

1. 準備處于指數生長的中期，細胞活率＞90%，狀態較好的細胞。 

2. 測定活細胞密度，計算所需的凍存培養基體積，最終細胞密度＞1×10 7cells/ml。

3. 準備所需的凍存培養基 90% StarCHO 培養基+10% DMSO，4℃冷藏保存。 

4. 400×g 離心 5 分鐘，用凍存培養基重新懸浮細胞。 

5. 根據項目具體需要，將懸浮液進行等分保存于適宜規格的冷凍管中。 

6. 按照標準程序，對冷凍管進行自動或手工操作降溫（每分鐘降 1℃）。 

7. 將細胞轉移到液氮罐中保存。