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OPM奧浦邁培養基SagiCHO Medium上?,F貨

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產品型號P226301

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所  在  地上海市

更新時間:2025-04-09 10:44:40瀏覽次數:521次

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OPM奧浦邁培養基SagiCHO Medium上海現貨,SagiCHOTM 是化學成分確定(Chemically-defined)基礎培養基,不含水解物、蛋白、生長因子及任何動物 來源的成分,適合于不同亞型中國倉鼠卵巢細胞(CHO-K1、CHO DG44 和 CHO-S 細胞)的高密度懸浮培養, 可實現重組蛋白和抗體的高水平表達。

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SagiCHOTM 是化學成分確定(Chemically-defined)基礎培養基,不含水解物、蛋白、生長因子及任何動物 來源的成分,適合于不同亞型中國倉鼠卵巢細胞(CHO-K1、CHO DG44 和 CHO-S 細胞)的高密度懸浮培養, 可實現重組蛋白和抗體的高水平表達。SagiCHOTM 基礎培養基與高性能補料及超濃縮補料聯用,可支持細胞高 密度生長及活率維持,實現更高水平的蛋白/抗體表達和質量。

應用范圍

SagiCHOTM 可應用于 CHO 細胞的復蘇、傳代以及高密度流加培養。該基礎培養基適用于科研和基于細胞培養 的大規模生物制品的生產,但不可直接用于人體或作為藥物使用。

儲存:2~8℃冷藏,干燥避光保存

運輸:常溫(液體)、冷藏(干粉)

液體培養基配制方法

1. 取潔凈的配制容器,建議一次性配制體積不低于 1L;

2. 加入最終配制體積 90%的超純水或注射用水,水溫控制在 25~35°C;

3. 稱量 21.73 g/L 干粉培養基,緩慢加入水中攪拌 10 分鐘;

4. 稱量 2.22 g/L 碳酸(空格)氫鈉,加入水中攪拌;

5. 緩慢加入 5N NaOH 調節 pH 到 8.3-8.5,攪拌 30 分鐘,此時應完(空格)全溶解;

6. 緩慢加入 5N HCl 將 pH 調回至 7.0;

7. 定容到最終配液體積,繼續攪拌 5 分鐘,測 pH,用 5N NaOH 或 5N HCl 將 pH 調回至 7.0;

8. 取樣測滲透壓,加入 NaCl 調節滲透壓至 290±15 mOsm/kg(滲透壓計算公式:NaCl 添加量(g)=配液體 積(L)*(290-檢測值)/31.5);

9. 繼續攪拌 10 分鐘,無菌過濾到合適容器,2~8℃避光保存。


培養條件

溫度 37℃,濕度 80%,5~8% CO2

搖床設置:轉速 110~150rpm(振幅 50 mm)


細胞復蘇

1. 在 37℃水浴中快速(<2min)融化冷凍的細胞;

2. 將冷凍管中的細胞液全部轉移到 125ml 含有 30ml 預溫過的 SagiCHOTM 培養基的搖瓶中;

3. 放入 37℃,5~8% CO2,轉速 110~130rpm(振幅 50 mm),濕度 80%的搖床中培養;

4. 細胞至少傳代 2 次,待其完(空格)全復蘇,細胞倍增時間(Population Doubling Time,PDT)穩定后,可按計 劃進行后續操作。


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細胞傳代

1. 將 SagiCHOTM培養基放入 37℃條件下預熱 20-30 min;

2. 取細胞密度≥1×106 cells/ml、活率≥90%、處于對數生長期中期的細胞進行傳代;

3. 按接種密度為 0.5×106 ~ 1.0×106 cells/L 的最終傳代體積,計算所需種子液量;

4. 無菌轉移所需量的種子液,添加至含所需體積的已預熱的 SagiCHOTM培養基的搖瓶中;

5. 將搖瓶放入溫度 37℃,濕度 80%,轉速 110~150rpm(振幅 50 mm),5%~8% CO2的細胞培養搖床中進 行培養;

6. 每 2~3 天用新鮮的培養基按上述步驟進行傳代培養。


細胞馴化

直接接種法

1. 對于可以直接接種的細胞,可以從無血清培養基中直接接種到 SagiCHOTM 培養基中,接種密度參考傳代 步驟,并需要依據具體情況而定。

2. 繼續傳代細胞,直到細胞穩定生長。

3. 傳代幾次后,細胞密度在接種的 3~4 天內達到 2×106 cells/ml 及以上、細胞活率>90%,且倍增時間穩定, 此時可以認為細胞已被馴化成功。


梯度馴化法

1. 對于傳統的生長在 5~10%血清或無血清的細胞,采用梯度馴化法,接種密度 3×105 ~4×105 cells/ml。

2. 監測細胞生長情況,直到細胞密度達到≥2×106 cells/ml。

3. 用 SagiCHOTM培養基:原始培養基=25:75 的比例稀釋細胞。直到這個比例的培養基細胞生長良好,再進 一步稀釋培養。在接下來的每次操作中,提高 SagiCHOTM 培養基的比例,如下表所示。

4. 在完(空格)全使用 SagiCHOTM 培養基接種 3~4 天之后,活細胞計數應該至少達到 2×106 cells/ml,細胞活性≥ 90%。此時,細胞已經馴化到 SagiCHOTM培養基中。


細胞凍存

1. 準備處于指數生長的中期,細胞活率>90%,狀態較好的細胞。

2. 測定活細胞密度,計算所需的凍存培養基體積,最終細胞密度>1×107 cells/ml。

3. 準備所需的凍存培養基 90% SagiCHOTM 培養基+10%DMSO,4℃冷藏保存。

4. 400×g 離心 5 分鐘,用凍存培養基重新懸浮細胞。

5. 根據項目具體需要,將懸浮液進行等分保存于適宜規格的冷凍管中。

6. 按照標準程序,對冷凍管進行自動或手工操作降溫(每分鐘降 1℃)。

7. 將細胞轉移到液氮罐中保存。


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