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上海惠誠生物科技有限公司
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DNA 恒溫快速擴增試劑盒熒光型說明書

時間:2024/11/1閱讀:203
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DNA 恒溫快速擴增試劑盒(熒光型)


產品參數:


試劑組分
組成 Component規格 Specification數量 Quantity功能 Function
A buffer1.6ml1管主要為穩定蛋白/酶,性能的緩沖體系
B buffer0.15ml1管主要為鎂離子等激活體系
正對照模板0.1ml1管主要是陽性質粒模版為檢驗試劑盒的有效性
正對照引物MIX0.06ml
1管主要是正對照模版的引物組合
凍干粉試劑8T/排,16T/包3包蛋白/酶體系的試劑工藝:凍干粉、凍干微球



原理概述:

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術:在常溫恒溫下,重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復合體 Rec/ssDNA,在輔助蛋白和單鏈結合蛋白 SSB 的幫助下,侵入雙鏈 DNA 模板;在侵入位點形成 D-loop區域,并開始對 DNA 雙鏈進行掃描;待找到與引物互補的目的區域后,復合體Rec/ssDNA 解體的同時,聚合酶也結合到引物的 3’末端,開始鏈的延伸。本試劑盒在39 oC 下,依賴核酸外切酶的作用,加入根據模板設計的特異的分子探針,使用熒光監測設備能實現對目標片段擴增過程的實時監控。


原理1.jpg

原理2.jpg

引物設計 :

建議使用長度在 30-35 bp 的引物,引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度;引物設計避免形成二級結構而影響擴增;擴增子長度建議在 150-300 bp,通常不超過 500 bp。


熒光探針設計:

探針序列不與特異性引物識別位點重疊,長度為 46-52 nt,序列避免回文序列、內部二級結構和連續的重復堿基。探針共有四個修飾位點:距離 5’端的≥ 35 nt 的中部位置標記一個 dSpacer(四氫呋喃,THF),作為核酸外切酶的識別位點;THF 位點的上游標記一個熒光基團,下游標記一個粹滅基團,兩個基團的間距為2-4 nt;THF 距離3’末端≥15 nt,并且 3’末端標記一個修飾基團,例如胺基、磷酸基團或 C3-Spacer。


1683359887693099.png

正對照熒光結果圖: P:正對照;N:陰性對照


產品特點及優勢:

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時間短(僅需 20 min)等優點,反應組分為干粉狀態,操作簡便,易于保存。可適用于各種品牌的熒光定量 PCR 儀、恒溫熒光擴增儀器等熒光檢測設備。


產品用途:

適用于實驗室級別的DNA擴增以及其他檢測用途的DNA擴增使用。


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