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本生詳解抗體的制備方法與原理

時間:2021/1/4閱讀:1496
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  本生詳解抗體的制備方法與原理

  抗血清的制備

  有了質量好的抗原,還必須選擇適當的免疫途徑,才能產生質量好(特異性強和效價高)的抗體。

  ()用于免疫的動物

  作免疫用的動物有哺乳類和禽類,主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量,如般制備抗r-免疫球蛋白抗血清,多用家兔和山羊,因動物反應良好,而且能夠提供足夠數量的血清,用于免疫的動物應適齡,健壯,無感染性疾患,-好為雄性,此外還需十分注意動物的飼養,以消除動物的個體差異以及在免疫過程中死亡的影響。若用兔,-好用純種新西蘭兔,組三只,兔的體重以2~3kg為宜。

  (二)免疫途徑

  免疫途徑有多種多樣,如靜脈內、腹腔內、肌肉內、皮內、皮下、淋巴結內注射等,般常用皮下或背部多點皮內注射,每點注射0.1ml左右。途徑的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性,如激素、酶、毒素等生物學活性抗原,般不宜采用靜脈注射。

  (三)佐劑

  由于不同個體對同抗原的反應性不同,而且不同抗原產生免疫反應的能力也有強有弱,因此常常在注射抗原的同時,加入能增強抗原的抗原性物質,以刺激機體產生較強的免疫反應,這種物質稱為免疫佐劑。

  佐劑除了延長抗原在體內的存留時間,增加抗原刺激作用外,更主要的是,它能刺激網狀內皮系統,使參與免疫反應的免疫活性細胞增多,促進T細胞與B細胞的相互作用,從而增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的產生。

  常用的佐劑是福氏佐劑(Freund adjuvant),其成分通常是羊毛脂1份、石臘油5份,羊毛脂與石臘油的比例,視需要可調整為1:2~9(V/V),這是不*福氏佐劑,在每毫升不*佐劑加入1~20mg卡介苗就成為*佐劑。

  配制方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內,用超聲波使之混勻,高壓滅菌,置4℃下保存備用。免疫取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合,用振蕩器混勻成乳狀,也可以在免疫取需要量佐劑置乳缽中研磨,均勻后再邊磨邊滴加入等容積抗原液(其中加卡介苗3~4mg/ml或不加),加完后再繼續研磨成乳劑,滴于冰水上5~10min內*不擴散為止。為避免損失抗原,亦可用注射器裝抗原液,另注射器裝佐劑,二者以聚乙烯塑料管連接,然后二者來回反復抽吸,約數十分鐘后即能*乳化。檢查合格后即以其中注射器作注射用。

  (四)免疫方法

  抗原劑量,次劑量為300~500μg,加強免疫的劑量約為次劑量為1/4左右。每2~3周加強免疫次。加強免疫時用不*佐劑,次免疫時皮下注射百日咳疫苗0.5ml,加強免疫時不必注射百日咳疫苗。

  在第2次加強免疫后2周,從耳緣靜脈取2~3ml血,制備血清,檢測抗體效價(見后)。如未達到預期效價,需再進行加強免疫,直到滿意時為止(圖2-3)。當抗體效價達到預期水平時,即可放血制備抗血清。

  抗體的制備方法與原理先和大家介紹到這,如果想要了解更多抗體的信息,可以關注天津本生生物,本生業給生物醫藥客戶提供生物實驗室檢測耗材,試劑,歡迎廣大客戶來詢。

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