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分析方法的檢測限、定量限及其驗證

閱讀:5782        發布時間:2020-5-29

前言
檢測限和定量限是分析方法的重要屬性,在中國藥典2020年版分析方法驗證指導原則[1]中規定這2項是重要的驗證指標,包括定量、限度的雜質測定需要著重考慮檢測限和定量限,且在該版本指導原則中刪除了校正因子以及其中定量限的規定。本文試圖從定義、測量方法、問題和解決方案進行簡單的討論,為分析方法驗證活動中檢測限和定量限的的開展提供一定的參考。 
1、檢測限和定量限的定義
檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的低量,定量限系指試樣中被測物能被定量測定的低量。檢測限僅作為限度試驗指標和定性鑒別的依據,沒有定量意義。而對微量或痕量藥物分析、定量測定藥物雜質和降解產物時,應確定方法的定量限,需要注意的是定量限的測定結果應符合準確度和精密度要求。 
2、檢測限和定量限的測量方法
檢測限和定量限的測量方法有直觀法、信噪比法、基于響應值標準偏差和標準曲線斜率法等3種方法,不同方法應用范圍有所不同[2]:
(1)直觀法主要用于非儀器方法,通過目視法觀察逐級稀釋進樣獲得非儀器方法檢出限(或定量測定)的低濃度或量。
(2)信噪比法適用于能顯示基線噪音的儀器分析方法,是通過已知低濃度的被測物的檢測信號與基線噪音比較,確定可被檢測出的小量或濃度。檢測限一般以信噪比為3:1或2:1;定量限一般以信噪比為10:1。
(3)基于響應值標準偏差和標準曲線斜率法可采用已知標準物質與空白樣品,或已知含量的樣品在低濃度范圍按照分析步驟進行測量,通過分析相當數量的樣品(需要12~20份)計算方法的檢出限和定量測定低濃度或量,其計算公式為(公式1):
LOD(LOQ)=3.3(或10)δ/S  
式中:LOD(LOQ):檢測限(定量限);δ:響應值的偏差;S:標準曲線的斜率。δ可以通過下列方法測得:(1)測定空白值的標準偏差;(2)標準曲線的剩余標準偏差或是截距的標準偏差來代替。
當已知含量標準物質為單點時,檢出限公式也可以表達如下(定量限DL公式相同,置信因子取10,公式2):
3、檢測限和定量限的問題
由于使用上的方便性,信噪比法是目前方法驗證中的測量方法。但信噪比受檢測儀器狀態的影響很大,且與耗材、試劑、樣品前處理等多種因素相關,按信噪比3/10計算與驗證過的檢測限/定量限在下一次檢測時并不是方法的檢測限/定量限,因此導致方法驗證出現異常,測量的定量
 

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