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色譜柱在分析中的經(jīng)驗
Q1:色譜柱是否可以反沖，那什么柱子可以反沖，什么不可以?反沖后是正著用，還是反著用?
這是一個困擾很多液相使用者的問題。
很多人說，如果色譜柱柱頭堵了，壓力升高了，反沖完了效果很好！
也有很多人，包括廠商的工程師說不建議反沖，沖了會影響柱效。
多種說法眾說紛紜，讓這個問題幾乎成了一個業(yè)界之謎。
那么，今天我們就來分析討論一下，色譜柱到底能不能反沖，以及背后的原因是什么？
我們都知道，大多數(shù)液相色譜柱里面充滿了直徑幾個微米的硅膠小球，這些硅膠小球在高壓條件下被填入了色譜柱以后，色譜柱的兩端需要用篩板封起來，這樣既能夠讓流動相順利通過，又保硅膠小球老老實實呆在色譜柱里面，不會跟著流動相跑出來。
當(dāng)然篩板的孔徑要夠小，不然就封不住硅膠小球。
但是入口篩板孔徑如果做得特小，也會產(chǎn)生一個問題，那就是很容易被樣品堵塞。樣品稍微有一點(diǎn)沒處理好，或者沒有溶解好，篩板就被堵了，柱壓就升高了，至柱子就廢掉了。
所以，很多廠商就決定把色譜柱入口的篩板孔徑做得比出口篩板的孔徑大一些，這樣既能保硅膠小球不會被沖出色譜柱，也能讓柱頭不那么容易堵塞。
但是，這種情況下，色譜柱往往就不能反沖了。
因為如果反沖，在把堵塞在入口篩板上的污染物沖出來的同時，柱頭的填料可能也會被沖出來，造成柱效的降，至色譜柱的報廢。
說到這里，我們總結(jié)一下：
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如果色譜柱出入口篩板孔徑一樣的話，那就可以反沖，正反使用都無所謂，即使是色譜柱上面標(biāo)注了方向（還需注意色譜柱的填料基質(zhì)）。
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但是如果色譜柱出入口篩板孔徑不一樣的話（一般是入口孔徑大于出口孔徑），反沖就有可能造成填料漏出，柱效降等等。
Q2:如果柱子取下來放置一段時間，需要做什么保護(hù)嗎?
對一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發(fā)，應(yīng)該不需要做殊的保護(hù)。
Q3:多個樣品不好不離的時候，請問該怎么通過選擇合適的柱子來提分離度?
提分離度可從三個主要影響因素來考慮，柱效、選擇性和保留因子。可通過減小填料粒徑和增加柱長提柱效;選擇性和固定相選擇以及pH 條件有關(guān)，通過選擇合適的色譜柱和合適的pH，可以提選擇性;有時候適當(dāng)延出峰時間增加保留因子，也可提分離度。
Q4:因為不知道流動相已走完，液相色譜柱空走了大概一晚上，請問這種情況下柱子還能用嗎?如果可以應(yīng)該如何再生?
還能用的。可能柱子里會有氣泡進(jìn)去，但之后多用流動相沖沖，看到基線穩(wěn)定，就沒問題了。用色譜柱的保存液低流速長時間沖洗，然后再檢測一下柱效，看柱子是否恢復(fù)，液相建議設(shè)置一下壓限，這樣就不怕流動相光而會色譜柱。