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液相色譜柱的分類方法

閱讀:1505        發布時間:2019-8-5

液相色譜柱的分類方法很多,可以按照鍵合相類型、用途、基質種類等進行分類。

按照分離規模,我們可以把它分成以下八種:納流柱、毛細管柱、微徑柱、窄徑柱、溶劑節省柱、分析柱、半制備柱、制備柱

目前對于液相色譜分析較常用的是分析柱窄徑柱

其中分析柱的內徑是4.6mm,常用于常規液相,通常情況下它的流量建議在0.5-3ml/min

窄徑柱大多使用在快速液相UPLCUHPLC中,建議流量是0.1-0.5ml/min

納流柱、毛細管柱、微徑柱它們的內徑分別是0.1-0.075mm0.3/0.5mm1.0mm,它們的靈敏度較高,比較適合在LCMS中使用,其中毛細管柱和納流柱可以應用在多肽和蛋白質的分析中。

溶劑節省柱大多是指內徑3mm的色譜柱,由于生產工藝等原因它的應用并不是很多,如果您正在使用,較建議使用的流量是0.3-1.5ml/min

半制備柱制備柱大多使用在分離較純的標準品中。其中半制備柱使用在mg級制備分離。制備柱使用在大規模制備數百mg至1g制備。

它們的內徑分別是9.4mm21.2mm,流量建議設為5-10ml/min20-60ml/min

了解了液相色譜柱的分類,大家就可以根據自己的需求進行選擇了。

在選擇色譜柱之前,也可以先多了解自己的樣品和雜質,他們的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等。

1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱

2. 如果樣品極性太強,或酸性太強;可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點是離子對試劑平衡時間長,對流動相pH要求比較精密,否 則很難重復實驗,另外離子對試劑很難洗下來,基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)

3. 若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質,且硅膠端基封尾)或一些經過修飾的C18柱(如極性嵌入技術或堿去活技術等),他們都會減少堿性化合物的拖尾,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留

4.如果堿性化合物的極性太強,或堿性太強;可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優點是方法開發簡單,缺點是目前實 現這一技術的色譜柱品牌比較少,價格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用,這也是很經典的檢測堿性樣品的方法)選擇強離子交換柱(缺點 是不能用來分析其它樣品,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復實驗)也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱

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