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色譜柱的預(yù)防措施
在液相色譜的使用中，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)室會(huì)面臨色譜柱頻繁損壞的問題。所以，這次我們就來討論一下色譜柱的預(yù)防措施吧。
影響色譜柱使用的因素
1.流動(dòng)相pH
不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍。其實(shí)，在工作過程中大多數(shù)的顆粒物堵塞導(dǎo)致的色譜柱背壓升高問題是體現(xiàn)在柱頭堵塞。當(dāng)流動(dòng)相pH超出堿性范圍時(shí)，會(huì)加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子;當(dāng)流動(dòng)相pH值超出酸性范圍時(shí)，鍵合相易發(fā)生水解而流失，這兩種反應(yīng)均是不可逆反應(yīng)，特別是在溫度較高(>40℃)的環(huán)境下，會(huì)使柱效迅速降低而報(bào)廢。
而樣品的易吸附機(jī)制也可能會(huì)和柱前端的硅膠表面游離的硅醇基發(fā)生作用導(dǎo)致色譜柱背壓升高。但是這種情況在較低的PH系統(tǒng)中會(huì)有所改善，因?yàn)檩^低的PH系統(tǒng)會(huì)降低硅膠表面的硅醇基發(fā)生解離。
2.流動(dòng)相變質(zhì)
當(dāng)前使用為廣泛的是硅基鍵合相填料，當(dāng)以水溶液作為流動(dòng)相或流動(dòng)相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時(shí)，水溶液中或緩沖鹽溶液中會(huì)滋生出一些細(xì)菌或霉菌，從而堵塞固定相顆粒間的空隙。特別是對(duì)于多元自動(dòng)比例混合的液相色譜儀來說,水相或緩沖鹽相獨(dú)立存貯，因存放時(shí)間較長(zhǎng)而容易發(fā)生此類問題。
3. 流動(dòng)相純度
目前，廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm,孔徑在6～10nm,色譜柱在使用中會(huì)有大量的流動(dòng)相通過,如流動(dòng)相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成色譜柱機(jī)械性堵塞,引起柱壓升高而無法正常使用。
4.其它因素
影響色譜柱壽命的因素很多，除流動(dòng)相和樣品因素外，還有其它一些外在因素，如，柱壓的影響，溫度的影響，色譜柱的正確沖洗，色譜柱的正確安裝等。
預(yù)防措施
為了降低色譜柱的損傷問題，大家在使用色譜柱時(shí)可以做一些預(yù)防。例如：
1在液相系統(tǒng)中加入在線過濾器
在線過濾器的內(nèi)部顆粒空隙一般是0.5微米，對(duì)于UHPLC會(huì)選擇0.2微米空隙的在線過濾器。這個(gè)空隙尺寸和柱頭的過濾篩板尺寸接近或者略小。
所以，在線過濾器能夠有效的阻隔來自樣品、泵頭密封墊、自動(dòng)進(jìn)樣器的轉(zhuǎn)子密封墊的顆粒物，以防止柱頭過濾篩板的堵塞。
2在柱子前端使用保護(hù)柱
保護(hù)柱有很多種，通用型、一體式、卡套式，但是它其實(shí)是一個(gè)和分析柱固定相相同的10-20mm的小柱子。
因?yàn)樗哂泻头治鲋嗤膬?nèi)部填料，所以保護(hù)柱不僅可以阻隔顆粒物，還可以阻隔易吸附的樣品基質(zhì)組分。
3對(duì)樣品進(jìn)行凈化處理
有一些液相的分析方法沒有明確標(biāo)注樣品的凈化，但希望大家在做分析時(shí)都能夠考慮樣品的凈化，常用的方案是對(duì)樣品進(jìn)行過濾。
色譜柱損壞的簡(jiǎn)單消除方法
由于化學(xué)損壞多發(fā)于色譜柱的前端，因此把色譜柱的前端修整或切割掉1/2-1 米通常可以消除所有色譜方面的故障。在更為嚴(yán)重的情況下，可能需要切割掉5 米或更長(zhǎng)的一段。使用保護(hù)柱或保留間隙柱會(huì)將對(duì)色譜柱的損壞降至小，但是，需要經(jīng)常修整保護(hù)柱。酸或堿常常會(huì)破壞熔融石英管線的脫活表面，從而引起活性化合物的峰形變壞。
保存
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，色譜柱的合理保存也是保護(hù)色譜柱的關(guān)鍵，同時(shí)也是影響色譜柱使用壽命的關(guān)鍵。
1、短期保存
應(yīng)保存在接近常用的流動(dòng)相條件下，并且移除系統(tǒng)中的緩沖鹽、酸等。
2、長(zhǎng)期保存
將色譜柱按照說明書保存在對(duì)應(yīng)的溶劑中，并且將色譜柱從系統(tǒng)中去下，兩頭用堵頭密封。