當前位置：上海淳麥生物科技有限公司> 供求商機> THLE-2人肝永生化細胞
| 細胞名稱：THLE-2人肝永生化細胞種屬來源：人 組織來源：肝 細胞形態：上皮細胞樣 生長特性：貼壁細胞 生長條件：氣相：100%空氣；溫度：37℃ 傳代方法：1:2至1:3，每周 3次 凍存條件：無血清細胞凍存液，液氮儲存 支原體檢測：無 THLE-2人肝永生化細胞 培養操作 1）復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 2）THLE-2人肝永生化細胞 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。 a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。 c、按6-8 mL/瓶補加培養基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。 d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。 3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例； a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數。 b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
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