XL1-Blue Electro
XL1-Blue Electroporation-Competent Cell

       XL1-Blue 電轉化感受態細胞基因型：

recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 (rk-,mk+), relA1 lac [F' proAB lacIqZ?M15:Tn10 (tetr)]


         XL1-Blue 電轉化感受態細胞簡要說明：

XL1-Blue 電擊感受態細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。--

XL1-Blue 菌株能保證高拷貝質粒穩定復制，recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提 取。hsdR17 突變導致 EcoK 核酸內切酶系統缺失，增強了外源 DNA 的穩定性和提取質量。-- lacIqZΔM15 的存在使 XL1-Blue 菌株可用于藍、白斑篩選。此菌株具有四環素抗性。--
--XL1-Blue 電擊感受態細胞適用于各種文庫構建，經特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率可達 1× 1010 cfu/μg DNA。
  XL1-Blue 電轉化感受態細胞操作說明：

1. 0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘，待其瀝干水分，正置 5 分鐘，使乙醇充分揮發，

待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋，冰中靜置 5 分鐘充分降溫。

2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 電擊感受態細胞插入冰中 5 分鐘，待其融化，加入目的 DNA (質?；蜻B接產物)并用手EP 管底輕輕混勻，避免產生氣泡，立即插入冰中。 --
A. 測定轉化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對照質粒 pUC19；   --

B. 對于連接產物，請用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 T 緩沖液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重懸，DNA 濃度 不超過 100ng/μl，體積不超過 5μl/50μl 感受態。--
3. 用 200 μl 槍頭將感受態-DNA 混合物快速移到電擊杯中，避免產生氣泡，蓋上杯蓋--。

4. 啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉儀推薦參數，也可按所用電轉儀推 薦的參數操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。--
5. 2 分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入 700 μl 不含抗生素的無菌 S.O.C. 培養基（室溫），用 1ml 槍吹吸電擊 杯底部數次混勻后，轉移到 50ml 離心管（BD Falcon50ml 錐形離心管等），向離心管中補加 S.O.C. 培養基至 5ml。 37℃，225 rpm 復蘇 60 分鐘。--
6. 5000rpm 離心一分鐘收菌，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量較大，若全部涂板 請選用直徑 15cm 培養皿 2-5 個）。將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養 13-17 小時。--

  XL1-Blue 電轉化感受態細胞注意事項：

1. 加入 DNA 時體積不應大于感受態體積的 1/10。--

2. 電擊感受態細胞加入電擊杯應避免產生氣泡，氣泡會增加弧光放電風險。--

3.  當 DNA 不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉化效率急劇下降。 --

4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導，增大在含有細胞和 DNA 的溶液中產生電流和弧光放電的風險。--

5. 若轉化大質?；蛳氆@得較高轉化效率，推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍，轉化效率下降一個 數量級。 --
6. 對于連接產物轉化，轉化前乙醇沉淀 DNA 后用適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產 物，保證 DNA 濃度不超過 100 ng/μl。過高濃度連接產物或過大體積連接產物會降低轉化效率，增加弧光放電的風險。

7. 混入質粒時應輕柔操作，吸取感受態細胞時不可用孔徑過小的槍頭 (普通 200ul 槍頭應剪去槍頭尖 0.6cm)  避免用

力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉化效率。轉化高濃度的質粒或連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。

8. 電擊感受態細胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲存會導致轉化效率會下降。--