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上海硅儀生化科技有限公司

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紫外分光光度計的用途是什么?

閱讀:345      發布時間:2025-6-12
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紫外分光光度計(UV-Vis Spectrophotometer)是一種用于測量物質對紫外光(200–400 nm)和可見光(400–800 nm)吸收特性的分析儀器。它通過檢測樣品對特定波長光的吸收程度,進行定性或定量分析,廣泛應用于化學、生物、醫藥、環境等領域。以下是其主要用途和特點:


一、核心用途

  1. 定量分析

    • DNA/RNA濃度檢測(260 nm處吸光度,A260)。

    • 蛋白質定量(Bradford法、BCA法或直接280 nm測量)。

    • 藥物含量分析(如阿司匹林在230 nm處的吸收)。

    • 測定溶液中特定物質的濃度(如DNA/RNA、蛋白質、藥物成分)。

    • 依據朗伯-比爾定律(吸光度A = εlc,ε為摩爾吸光系數,l為光程,c為濃度),通過標準曲線計算未知樣品濃度。

    • 常見應用

  2. 定性分析

    • 有機化合物鑒定(如苯環在250 nm附近有特征吸收)。

    • 污染物檢測(如硝酸鹽在220 nm處吸收)。

    • 通過掃描樣品的吸收光譜(如200–800 nm),判斷物質結構或純度。

    • 示例

  3. 動力學研究

    • 監測化學反應過程中吸光度的實時變化,推算反應速率或中間產物濃度。

  4. 純度檢測

    • 通過吸收峰形和位置評估樣品純度(如蛋白質A280/A260比值判斷核酸污染)。


二、儀器組成與關鍵部件

  1. 光源:氘燈(紫外區)和鎢燈(可見光區)。

  2. 單色器:將復合光分離為單一波長光(光柵或棱鏡)。

  3. 樣品室:放置比色皿(石英用于紫外區,玻璃/塑料僅用于可見光區)。

  4. 檢測器:光電倍增管(PMT)或光電二極管陣列(PDA)。


三、操作注意事項

  1. 樣品準備

    • 液體需澄清無懸浮物(渾濁樣品需離心或過濾)。

    • 溶劑選擇:避免溶劑在測量波長下有強吸收(如苯在紫外區有吸收)。

  2. 比色皿使用

    • 紫外區用石英比色皿(玻璃會吸收紫外光)。

    • 手持比色皿時避免觸碰光面,需用擦鏡紙清潔。

  3. 基線校正

    • 測量前用空白溶劑(如純水或緩沖液)調零,消除背景干擾。

  4. 波長選擇

    • 選擇被測物質的最大吸收波長(λmax)以提高靈敏度。


四、常見應用場景

  1. 生命科學

    • DNA/RNA濃度和純度檢測(A260/A280比值)。

    • 酶活性測定(如NADH在340 nm處吸光度變化)。

  2. 制藥行業

    • 藥物含量測定、溶出度測試。

  3. 環境監測

    • 水質分析(如硝酸鹽、重金屬離子)。

  4. 食品工業

    • 添加劑檢測(如防腐劑苯甲酸在225 nm處吸收)。


五、優缺點

  • 優點:操作簡便、成本低、分析速度快。

  • 缺點

    • 僅適用于具有紫外或可見光吸收的物質。

    • 靈敏度低于熒光或質譜法,可能受雜質干擾。


六、擴展功能

部分儀器支持:

  • 多波長掃描:獲取全波段吸收光譜。

  • 時間驅動模式:追蹤反應動力學過程。

  • 反射附件:測量固體樣品(如薄膜、粉末)。

紫外分光光度計是實驗室的基礎設備,其數據可靠性依賴于規范操作和定期校準(如波長準確性、光度線性檢查)。


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