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目的建立一種檢測(cè)奇異變形桿菌（Proteus mirabilis）快速且特異的PCR方法。方法針對(duì)編碼奇異變形桿菌脲酶調(diào)節(jié)子（ureR）的基因序列設(shè)計(jì)2條PCR引物,擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為225bp;通過對(duì)2株奇異變形桿菌和14株非奇異變形桿菌進(jìn)行PCR檢測(cè)、利用該P(yáng)CR方法和傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法同時(shí)對(duì)60份食物中毒送檢標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)來評(píng)價(jià)其特異性;將奇異變形桿菌菌液做一系列10倍稀釋后進(jìn)行PCR檢測(cè)來對(duì)其進(jìn)行敏感性分析。結(jié)果2株奇異變形桿菌出現(xiàn)PCR擴(kuò)增反應(yīng),擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序鑒定正確,14株非奇異變形桿菌沒有出現(xiàn)PCR擴(kuò)增反應(yīng),且PCR檢測(cè)奇異變形桿菌的結(jié)果與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法一致,PCR方法相比傳統(tǒng)培養(yǎng)方法更快速,在4h內(nèi)即可完成擴(kuò)增反應(yīng);PCR方法敏感性為30cfu/ml。結(jié)論建立了一種快速、準(zhǔn)確檢測(cè)奇異變形桿菌的PCR方法,適合奇異變形桿菌日常監(jiān)測(cè)和快速診斷的需要。
初的PCR技術(shù)相當(dāng)不成熟，在當(dāng)時(shí)是一種操作復(fù)雜、成本高昂、“中看不中用”的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。1988年初，Keohanog通過對(duì)所使用的酶的改進(jìn)，提高了擴(kuò)增的真實(shí)性。而后，Saiki等人又在黃石公園從生活在溫泉中的水生嗜熱桿菌內(nèi)提取到一種耐熱的DNA聚合酶，使得PCR技術(shù)的擴(kuò)增效率大大提高。也正是由于此酶的發(fā)現(xiàn)使得PCR技術(shù)得到了廣泛地應(yīng)用，使該技術(shù)成為遺傳與分子生物學(xué) 分析的根本性基石。在以后的幾十年里，PCR方法被不斷改進(jìn)：它從一種定性的分析方法發(fā)展到定量測(cè)定；從原先只能擴(kuò)增幾個(gè)kb的基因到目前已能擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)幾十個(gè)kb的DNA片段。到目前為止，PCR技術(shù)已有十幾種之多，例如，將PCR與反轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合，成為反轉(zhuǎn)錄PCR，將PCR與抗體等相結(jié)合就成為免疫PCR等。