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白色念珠菌PCR試劑盒操作步驟夾心法
閱讀：1629 發布時間：2020-9-23白色念珠菌PCR試劑盒操作方法：
雙抗體夾心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時，洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10~30分鐘。
改良 Frey 氏培養基基礎 澳洲茄胺 ?異硫氫酸兔抗人、大、小鼠、兔 β-Amyloid 1-42IgG
改良 Frey 氏培養基基礎添加劑 β-桉葉醇 ?β淀粉樣肽1-42 C端IgG
改良 Frey 氏固體培養基基礎 艾黃素 ?β淀粉樣肽25-35IgG
支原體培養基基礎 D-阿拉伯糖醇 ?β淀粉樣肽31-35IgG
支原體培養基基礎添加劑 阿多尼弗林堿 ?14-3-3蛋白IgG
支原體固體培養基 阿卡波糖 ?磷酸化14-3-3 ζIgG
支原體固體培養基添加劑 安五脂素 ?2，4-二氯苯氧乙酸IgG
營養瓊脂NA 安格洛苷C ?4E結合蛋白1IgG
馬丁肉湯 阿奇霉素 ?磷酸化4E結合蛋白1IgG
馬丁肉湯 阿馬堿 ?磷酸化4E結合蛋白1IgG
馬丁瓊脂 9-氨基喜樹堿 ?磷酸化eIF4E結合蛋白IgG
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以"+"、"-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌;
6.'后一遍用DDW洗滌。