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液質(zhì)聯(lián)用儀測定蘋果中農(nóng)藥殘留物
閱讀：900 發(fā)布時間：2023-2-19摘要：本應(yīng)用指南介紹了一種簡單、快捷、廉價、有效、耐用、安全的(QuEChERS) 美國分析化學師協(xié)會于 2007 年 1 月制定的樣品制備方法及其應(yīng)用情況，該方法可用于蘋果中16 種農(nóng)藥殘留物的萃取和凈化。這 16 種農(nóng)藥基本代表了不同種類農(nóng)藥的性質(zhì)。該方法包括在水/乙腈緩沖體系中的初次萃取、加鹽后的萃取/分離步驟和利用分散固相萃取（分散 SPE）的凈化步驟，并對樣品萃取后兩種不同的分散固相萃取方法（1 mL 和 8 mL）進行了評估。通過液相色譜和電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜儀聯(lián)用（LC-ESI-MS/MS），在正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式下測定了蘋果萃取物中的目標農(nóng)藥。對該方法的回收率和重現(xiàn)性進行了驗證。本應(yīng)用方法的蘋果中農(nóng)藥的定量限（LOQ）為 5 ng/g，大大低于最大容許殘留（MRLs）。回收試驗的加標水平分別為 10、20、200 ng/g，平均回收率范圍為 76%到 117%（平均 85.4%），相對標準偏差低于 15%（平均 5.5%）。
前言水果、蔬菜以及其它食品中農(nóng)藥的多殘留物分析是世界各地許多法規(guī)機構(gòu)實驗室、行業(yè)實驗室以及合同實驗室的主要職能。由于農(nóng)藥的多樣性和食品基質(zhì)的復雜性，在進行分析之前，必須首先利用樣品制備技術(shù)對樣品進行凈化處理。毫無疑問，有效的進行農(nóng)藥分析的辦法就是應(yīng)用多類別和多殘留分析方法。一旦滿足了包括準確度、精度、靈敏度 、選擇性和動態(tài)范圍等分析質(zhì)量的主要要求，以適應(yīng)特定的分析需要，就必須對其它考慮因素進行評價。這些額外因素包括樣品處理量、耐用性、易用性、材料和勞動力成本、有毒溶劑的使用以及廢棄物的產(chǎn)生等。QuEChERS 方法是由美國農(nóng)業(yè)部（USDA）科學家于 2003 年首先推出。針對某些存在問題的農(nóng)藥，該方法又進行了修改，包括采用緩沖提取系統(tǒng)。經(jīng)過對 200 多種農(nóng)藥的全面驗證，該改進方法已于 2007 年 1 月被正式通過為美國分析化學師協(xié)會的方法。概括起來，該方法是用帶緩沖鹽的乙腈（1%醋酸溶液）進行一步萃取，然后用無水 MgSO4 從樣品中析出水分，以達到液-液分層。從有機液層中分出一等份，采用分散固相萃取步驟進行進一步凈化，結(jié)合使用伯氨仲氨(PSA)以從其它組分中除去脂肪酸，并用無水硫酸鎂減少萃取物中的殘留水量。經(jīng)混合、離心后取上層液用來進行分析。本研究選取了 16 種農(nóng)藥來評估安捷倫 AOAC 緩沖萃取試劑盒(部件號 5982-5755)和適用于一般水果和蔬菜分析的 Bond ElutQuEChERS AOAC 分散固相萃取試劑盒(部件 5982-5022 和 5982-5058)的性能，適合常見水果和蔬菜的應(yīng)用。選取了蘋果作為評估基質(zhì)。大部分農(nóng)藥都在原來的“代表性農(nóng)藥"列表上。根據(jù)已有經(jīng)驗，適合這些農(nóng)藥的分析方法同樣適合用多類別、多殘留方法常規(guī)檢測的幾乎所有其它農(nóng)藥。這 16 種農(nóng)藥來自于 9 種不同的農(nóng)藥類別，包括酸性、堿性、中性、堿敏性以及酸不穩(wěn)定性農(nóng)藥。而且，選取的農(nóng)藥還適合于 LC/MS/MS 分析。隨著農(nóng)藥類別和食品基質(zhì)的不同，這些農(nóng)藥的最高殘留（MRLs）也有變化，其設(shè)定值為 10 ng/g 或更高。表 1 給出了蘋果中各種農(nóng)藥的化學和法規(guī)信息。
實驗部分試劑和化學品所用藥品均為高效液相純級或分析純級。乙腈、甲醇來自霍尼韋爾（美國，馬斯基根，密歇根州）。二甲基亞砜(DMSO)、冰醋酸(HAc)購自 Sigma- Aldrich 公司（美國密蘇里州圣路易斯）。醋酸銨(NH4OAc)購自費舍爾化工(美國，新澤西，F(xiàn)air Lawn)。甲酸(FA)購自 Fluka(德國，Sleinheim)。農(nóng)藥標準物和內(nèi)標，磷酸三苯酯（TPP）購自 Sigma- Aldrich 公司（美國密蘇里州圣路易斯）、ChemService 公司（美國賓夕法尼亞州西切斯特）或 Ultra Scientific 公司（美國羅得島州北金斯敦）或 AlfaAesar(美國，馬薩諸塞州，Ward Hill)。溶劑及標準品將 19.27 g NH4OAc 粉末溶解在 250mLMilli-Q 超純水中，用 pH計監(jiān)控，用乙酸將溶液 pH 值調(diào)節(jié)到 5，得到 pH=5 的 1M 當量醋酸銨原液，并于 4 oC 低溫保存。將 200 mL 甲醇混入 800 mLMilli-Q 超純水中，加入 5 mL pH=5 的 1M 當量醋酸銨原液，混合均勻，得到 MeOH/H2O=20：80、pH=5 的 5 mM 醋酸銨溶液。向1 升乙腈中加入 5 mL pH=5 的 1 M 當量醋酸銨原液，均勻混合后超聲 5 min，即得含 5 mM 醋酸銨的乙腈溶液。含 1%甲酸的乙腈溶液可通過 100 mL 乙腈與 1 mL 甲酸混合均勻得到。標準品和內(nèi)標（IS）原液（除多菌靈為 0.5 mg/ mL 外，其余均為2.0 mg/ mL)分別由甲醇，含 0.1%甲酸溶液的乙腈或 DMSO 制得，于-20 oC 下低溫儲存。用 1:1 乙腈/水（含 0.1%甲酸）溶液配制1.5、7.5、30 µg/mL 的三種 QC 加標溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。制備標準品
的乙腈/水（含 0.1% 甲酸）=1:1 的標準溶液，濃度為 10 µg/mL，并通過適當稀釋標準溶液，配制標準曲線溶液，用于測定空白基質(zhì)萃取物的校準曲線。以 1:1 乙腈/H2O（1%甲酸）為溶劑，制備 15 µg/mL 的 TPP 溶液作為內(nèi)標。
儀器與材料• 配置二極管陣列檢測器的 Agilent 1200 系列高效液相色譜(美國，加州，圣克拉拉，安捷倫科技有限公司)• 帶電噴霧電離的 Agilent 6410 三重串聯(lián)四極桿液相色譜/質(zhì)譜系統(tǒng)(美國，加州，圣克拉拉，安捷倫科技有限公司)• 安捷倫 Bond Elut 有緩沖鹽的 QuEChERS AOAC 萃取試劑盒，部 件 號 5982-5755 和用于一 般 水果和蔬菜的 Bond ElutQuEChERS AOAC 分散固相萃取試劑盒，部件號 5982-5022 和5982-5058（安捷倫科技有限公司，威明頓，特拉華州，美國)• CentraCL3R 離心機（美國馬薩諸塞州 Thermo IEC）• 瓶口移液器（美國新澤西州，So Painfield，VWR）• Eppendorf 微型離心機（美國紐約，Westbury，Brinkmann 儀器公司）• 粉碎機（圣約瑟夫，密歇根州，美國）
高效液相色譜條件色譜柱： 安捷倫 ZORBAX 溶劑節(jié)省 Plus Eclipse PlusPhenyl-Hexyl，3.0 x 150 mm, 3.5 µm(部件號 959963-312)流速： 0.3 mL/min柱溫： 30 oC進樣量： 10 µL流動相： A，PH=5 的 5 mM 醋酸銨 MeOH/H2O=20:80 溶液；B，PH=5 的 5mM 醋酸銨乙腈溶液針清洗： 1:1:1:1 乙腈/甲醇/異丙醇/水（0.2%甲酸）梯度： 流速時間 % B (mL/min)0 20 0.30.5 20 0.38.0 100 0.310.0 100 0.310.01 20 0.512.0 100 0.513.0 停止后運行： 4 min總分析時間： 17 min質(zhì)譜條件正離子模式氣體溫度： 350 oC氣體流速： 10 L/min霧化器： 40 psi毛細管電壓： 4000 V與分析物相關(guān)的其它質(zhì)譜條件列于表 2
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結(jié)論用于一般水果和蔬菜的安捷倫 Bond Elut QuEChERS AOAC 有緩沖鹽的萃取試劑盒和 Bond Elut AOAC 分散固相萃取試劑盒為分析蘋果中有代表性農(nóng)藥提供了簡單、快速和有效的凈化方法。基于加標基質(zhì)的樣品分析，蘋果中多類別和多組分殘留農(nóng)藥的檢測回收率和重現(xiàn)性也是可以接受的。蘋果中的雜質(zhì)和基質(zhì)效應(yīng)很小，并且不影響任何目標化合物的定量。農(nóng)藥的定量限明顯低于法定的蘋果中農(nóng)藥的最高殘留（MRLs）。由于所選農(nóng)藥代表了各種各樣不同農(nóng)藥的種類和屬性，用于一般水果和蔬菜檢測的安捷倫 Bond Elut QuEChERS AOAC 萃取及分散試劑盒也可用于類似水果中的其它農(nóng)藥的分析。