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快速高分離度液相色譜配合紫外和四極桿質譜
閱讀：441 發布時間：2023-2-8本應用報告報道了使用 LC/MS 技術進行中藥中七種常見減肥藥摻雜物的篩查和鑒定方法。該方法采用安捷倫快速高分離度液相色譜（RRLC）分離和UV檢測進行色譜和光譜定性分析。單四極桿質譜法用于定性和定量鑒定，并測定加標樣品的回收率。研究的七個化合物均可產生 [M + H]+ 離子，這七個化合物的回收率在 60.9% 至106.3% 之間。本研究表明該方法準確、可靠，可以作為一種通用的方法進行中藥減肥藥和保健藥中摻雜物的篩查和確認。
引言隨著人民生活水平的提高，肥胖正在成為一個社會問題，減肥產品正成為流行的一類保健品。由于減肥產品面向公眾且日益流行，對這些產品的安全性應給予足夠的重視。一些中藥減肥藥或保健品制造商非法添加一些西藥制劑以提高治療效果。過度和長期使用這些添加了西藥的中藥會對健康造成巨大的損害。因此，必須建立快速、可靠、靈敏的檢測方法進行中藥減肥藥或保健品中摻雜物的檢測。安捷倫快速高分離度液相色譜（RRLC）使用亞 2 µm 填料技術，可有效地分離各個成分，在每次分析中更易于對廣泛的違禁成分進行分析。由二極管陣列檢測器得到的紫外（UV）光譜信息也有助于準確檢測目標組分。除UV檢測器外，單四極桿質譜由于其高靈敏度和更好的特異性正在成為一種快速、高效的通用檢測方法。本研究中，配備了二極管陣列檢測器（DAD）的安捷倫 RRLC 和單四極桿質譜系統被用于六種中藥減肥保健品中摻雜物的分析。
實驗部分儀器• Agilent 1200 系列 RRLC 系統，配備二元泵（低延遲體積配置）、脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器。• Agilent 6130 四極質譜儀，配備ESI離子源。RRLC 方法• 色譜柱：Agilent ZORBAX RRHDEclipse Plus C18 柱（(2.1 x 50 mm,1.8 µm) （部件號 959757-902）• 流動相：A：水+ 0.2%甲酸B：乙腈• 梯度條件：0-0.8 min，5%B；0.3-4 min，5% - 65% 的B• 流速：0.4 mL/min• 進樣量：2 µL• 柱溫：30 °C• 檢測波長：254 nm• 停止時間：5 min• 后運行時間：3 min質譜方法• 極性：正• 毛細管電壓：3000V• 干燥氣：8 L/min• 霧化器：35 psi• 干燥氣溫度：350 °C• 碎裂電壓VRA化學品和溶劑• 甲醇，乙腈（色譜純，Dikmapure）• 甲酸（色譜純，Dikma 科技公司）• 純凈水（Mill-Q 系統生產的純凈水）• 七種標準品（參考物質），包括鹽酸苯丙醇胺、氫氯噻嗪、鹽酸芬氟la明、酚酞和便塞停，所有這些藥品均購自 NICPB（國家藥品生物制品檢定所）。• 六個待測樣品，DYX 減肥茶、BSY 減肥茶、GJL 減肥茶、YST 減肥茶、降脂片劑和 QM 減肥膠囊。所有這些樣品均為市售產品。
標準溶液的配制一定量的氫氯噻嗪、苯丙醇胺、酚酞和便塞停加入一定量的甲醇，超聲溶解，轉移至50 mL 容量瓶，加甲醇定容，配制為儲備液。將儲備液用甲醇稀釋 10 倍，配制為紫外檢測工作液（約 20 µg/mL）。該工作液進一步用甲醇稀釋 20 倍，配制為質譜檢測工作液（約 1.0 µg/mL）。表 1 為各標準品的濃度。
膠囊內容物：打開膠囊，采用上述藥片的樣品制備方法進行樣品制備。膠囊殼：膠囊殼稱重，研磨成粉末。將相當于兩個膠囊殼重量的粉末轉移至 10 mL容量瓶，采用上述方法進行樣品制備。回收率實驗將標準品添加到兩個不同的陰性測試樣品（片劑和膠囊內容物）中進行加標回收率考察。采用上述方法進行測定，計算 SIM 模式檢測條件下的加標回收率。平行進行了空白實驗（兩個加標樣品和兩個空白）。
結果與討論HPLC 分析含氮原子的化合物在甲酸存在的條件下能產生較好的正離子信號。這七種樣品有不同的結構和疏水性，所以采用梯度洗脫進行色譜分離。如圖 1 所示，檢測到的一些物質的保留和分離獲得了令人滿意的結果。整個分離過程在 5 分鐘內完成。與其它物質的色譜峰相比，鹽酸苯丙醇胺、鹽酸芬氟la明和鹽酸西bu曲明的色譜峰在該流動相條件下表現出一定展寬，這些是由于化合物的兩性官能團導致的。
采用 2.1 mm 內徑色譜柱和 0.4 mL/min的流速，不進行分流也可進行質譜分析，并能采集到令人滿意的質譜信號。因為它沒有采用如高濃度的鹽緩沖液等條件，該分析方法并沒有對柱效產生負面影響。即使進樣 150 次以后，柱效也無明顯下降。
樣品分析• 在 DYX、YST、BSY 和 GJL 減肥茶和降脂片中檢測到了咖fei因。• 在 QM 減肥膠囊中檢測到了鹽酸西bu曲明（如產品包裝所示）。圖 6 和圖 9 的色譜圖表明，陽性樣品中采用紫外和質譜均可檢測到目標化合物。DAD 紫外光譜可為目標化合物的存在提供有用信息。因此，RRLC-UV 可用作目標化合物快速篩查的工具。然而，對于組成成分復雜的樣品，采用單一的分離方法不容易將所有成分分離。采集到的 DAD 光譜由于不分離而發生了疊加。這時就需要采用質譜或其它方法對某些成分進行進一步確認。
在 DYX 減肥茶（0.6 mg/g，圖 4）、BSY 減肥茶 (0.37 mg/g, 圖 7)、GJL 減肥茶 (0.74 mg/g, 圖 10)、YST 減肥茶(0.94 mg/g, 圖 13)、降脂片 (1 mg/g,圖 16) 中均檢測到了咖fei因，含量均低于每日允許劑量。QM 減肥膠囊中檢測到的鹽酸西布qu明為每顆膠囊含鹽酸西布qu明 10.86 mg，產品包裝上標示為每顆膠囊 10 mg。
結論結果表明單四極桿質譜法是一種可用于中藥減肥藥和保健品中摻雜物篩查和鑒定的簡單且易于使用的檢測工具。