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技術(shù)文章

液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)檢測大鼠血液中的氯氮ping及其代謝物

閱讀:526          發(fā)布時間:2022-8-17

實驗部分樣品制備向大鼠全血中加入不同濃度的氯氮ping、去甲氯氮ping和 N-氧化氯氮ping (0.5 - 10000 ng/mL)作為氯氮ping及其代謝物的校正標準。然后將校正標準 (20 µL) 點到寶萊 DBS 2B 型卡片上,各重復 3 次,干燥過夜待分析。以點有大鼠全血的 DBS 卡片作為空白樣品。以氘代氯氮ping(D4) 作為氯氮ping及其代謝物定量的內(nèi)標。系統(tǒng)配置AACE LC/MS 系統(tǒng)(圖 2)包括:可進行 DBS 卡片自動化分析的 AACE 儀器10;兩臺 Agilent 1260 Infinity 二元液相色譜泵(一臺用于在線樣品提取和凈化,另一臺用于分析型液相色譜分離);用于樣品稀釋的 Agilent 1260 Infinity 等度液相色譜泵;用于分析物檢測的 Agilent 6460 三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用LC/MS 系統(tǒng)。系統(tǒng)中所有組件和 DBS 卡片提取、樣品捕集、洗脫和 LC/MS 分析的整個過程均由單一軟件程序進行控制(圖 3)。

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質(zhì)譜儀設置質(zhì)譜分析使用以正離子化模式運行的配置安捷倫噴射流離子源的 6460 三重四級桿LC/MS 系統(tǒng)進行。離子源條件和多反應監(jiān)測 (MRM) 方法參數(shù)已針對氯氮ping及其代謝物進行了優(yōu)化(表 3)。DBS 方法時間段設置時間段 1 從 DBS 中提取樣品至捕集柱 1 90 s時間段 2 捕集柱 1 樣品沖洗 70 s時間段 3 將樣品從捕集柱 1 轉(zhuǎn)移至捕集柱 2 30 s時間段 4 運行分析及捕集柱 1 沖洗和平衡 240 s


DBS 分析方法包括一個樣品加載的初始準備階段,和具有不同閥位置及泵程序的四個優(yōu)化時間段(時間段 1 - 時間段 4),以便進行在線樣品提取、捕集和凈化,以及LC/MS 分析。如圖 4 所示,時間段 1 中將啟動提取泵程序和稀釋泵程序,而時間段 4 中將啟動分析泵程序和 6460 三重四級桿 LC/MS 系統(tǒng)。在分析型 LC 梯度仍在運行時即可再啟動下一次 DBS 提取的提取泵程序。因此,提取步驟與分析運行在時間上是相互重疊的,使分析周期(連續(xù)兩次 DBS 提取之間的持續(xù)時間)能夠縮短至 10 分鐘以內(nèi)。

22.png

……

結(jié)論我們已經(jīng)證實使用自動化在線卡片提取系統(tǒng),可利用 LC/MS 直接對 DBS 卡片上大鼠全血中的氯氮ping及其兩種代謝物進行分析。該系統(tǒng)可提供靈敏度,其LOQ 為 0.5 ng/mL,并可在超過 4 個數(shù)量級的動態(tài)范圍內(nèi)提供優(yōu)異的線性(平均 R2> 0.999)。定量分析的準確度 (85 –109%)、重現(xiàn)性 (%RSD < 6.2%) 和精確度 (%RSD< 8.9%) 良好,且均符合生物分析可接受標準。此外,自動化在線卡片提取系統(tǒng)與離線提取打孔方法相比,定量性能相差無幾。

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