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技術文章

液質(zhì)聯(lián)用對食品中的組胺進行快速、簡便和可靠的分析

閱讀:955          發(fā)布時間:2022-7-24

應用簡報介紹了一種采用 UHPLC-MS/MS 和多反應監(jiān)測 (MRM)模式的簡單、快速的分析方法。該方法結(jié)合了本實驗室已驗證適合后續(xù) LC/MS 分析的快速酸萃取及過濾步驟,不僅適合于組胺的分析,同時也可應用于酪胺和色胺的分析。質(zhì)譜的使用則可省掉衍生步驟。實際上,質(zhì)譜的使用也可增加結(jié)果的可靠性,因為氘代內(nèi)標可跟蹤分析的全過程。


實驗部分試劑和標準品天然組胺和氘代組胺標準品從 Qmx 實驗室 (Thaxted, UK) 獲得。天然標準品用乙腈配制成 1000 ppm 的工作溶液。然后用 0.1 MHCl 稀釋得到校準曲線所需的濃度梯度。儀器本方法采用 Agilent 1290 Infinity LC 系統(tǒng)聯(lián)用配有安捷倫噴射流離子聚焦技術的 Agilent 6490 三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng)。儀器條件在表 1 中列出。樣品前處理將 10 g 食品樣品和氘代內(nèi)標物加入 50 mL 0.1 M HCl 中。渦旋混合并通過 0.2 µm 尼龍濾膜進行過濾。校準溶液的濃度范圍為 1 -50 mg/L。以往分析中常見的生物胺的濃度為 5 - 250 mg/kg,因而需將樣品稀釋 5 倍以滿足準確定量要求。若樣品濃度更大,則需加大樣品的稀釋倍數(shù),使得待分析液的最終濃度在校準濃度范圍之內(nèi)。

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結(jié)果與討論色譜分離采用 C3 色譜柱可使組胺在色譜柱上有較好的保留,同時又能最小化基質(zhì)效應并能確保與干擾組分的分離。在較低濃度時,具有相同 MRM 離子對的其它化合物也出現(xiàn)在譜圖上。然而,內(nèi)標可讓色譜圖上峰的歸屬毋庸置疑。


硬奶酪樣品樣品 A 的濃度較校準濃度低,然而該方法的靈敏度*分析的要求,可基于校準擬合得到半定量的結(jié)果。在該分析實例中,提取過程是將 10 g 樣品溶于 50 mL 0.1 M HCl 中提取,初步估計組胺的天然濃度為 1 mg/kg。樣品 B 則是添加了 300 ppm組胺的樣品,可確定方法的回收率。第二個實例中的提取則是將10 g 樣品溶于 100 mL 0.1 M HCl 中,該實驗結(jié)果為 289 mg/kg(回收率大于 96%)。

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定量及靈敏度從 0.1 M HCl 中組胺的校準曲線可知,組胺在 1 - 50 mg/L 濃度范圍內(nèi)具有很好的線性,R2 值大于 0.999(圖 2)。實際上,該范圍的下限顯著低于歐盟法規(guī)要求的水平。因此,該方法非常有潛力對更低濃度水平的樣品進行定量分析,如圖 1 所示,這對于食品基質(zhì)中生物胺的初期形成的考察是非常有用的。


其它工作回收率實驗通過在魚組織中添加 100 mg/kg 標準品 (n=10) 進行。組胺的回收率為 99 ± 4.6%。另外兩種生物胺的數(shù)據(jù)沒有在此列出,若有需要可向作者索要。


結(jié)論目前已開發(fā)了一種簡單、快速、便于操作的分析技術來進行食品中組胺的檢測。它結(jié)合了快速經(jīng)濟的提取過程及高靈敏度的LC/MS/MS 分析檢測。該檢測基于配備安捷倫噴射流技術的6490 三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng)。該方法的檢測限顯著低于歐盟法規(guī)限liang值。另外,該方法也很有可能被應用于其它的安捷倫三重四極桿系統(tǒng)。也可以采用相同的離子對,盡管安捷倫對于其它類型的儀器會推薦不同的離子源條件。該方法也可進行其它生物胺的同時測定。在 Campden BRI 實驗室,為應對及支持食品檢測工作,已經(jīng)建立了部分生物胺的反應離子對通道及相關條件。

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