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液質聯用儀分析雞肉中的農藥殘留
閱讀：585 發布時間：2022-6-5摘要：本應用簡報描述了使用快速、簡便、經濟、高效、耐用和安全 (QuEChERS) 的 AOAC 樣品制備方法來萃取和凈化雞肉中多種農藥類型典型代表的 12 種農藥殘留。早期的 AOAC方法采用了在水/乙腈緩沖系統中進行的初萃取、加入鹽分后的萃取/分離步驟，以及使用分散固相萃取 (dispersive SPE) 的凈化步驟。然后通過液相色譜與在陽離子多反應監測(MRM) 模式下操作的電噴霧離子化串聯質譜儀 (LC/ESI/MS/MS) 進行聯用，來確定雞肉提取物中是否存在目標農藥。回收率實驗的加標水平為 10 和 50 ng/g。平均回收率在76% 至 107% 范圍內，相對標準偏差 RSD 低于 10%。
前言AOAC QuEChERS 方法廣泛應用于食品中的農藥分析 [1,2]。本方法采用乙腈提取，然后利用無水硫酸鎂 (MgSO4) 將樣品中的水進行鹽析分離，以醋酸鹽緩沖液誘導分離。而凈化方面，本應用選擇了其他食品方法中所用的 Agilent 分散 SPE 試劑盒。這類試劑盒的樣品容量為 8 mL，含 900 mg MgSO4，在每毫升乙腈提取物中加入 150 mg C18。在本研究中，分析 12 種農藥以便于對適用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut AOAC 緩沖提取試劑盒和Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 試劑盒的性能進行評估。該方法已通過分析物回收率和重現性驗證。表 1 所示為雞肉中農藥的化學和法規信息。
實驗部分所有試劑和溶劑均為 HPLC液相色譜儀 或分析純級。甲醇 (MeOH) 和乙腈(ACN) 購自 Honeywell（美國密歇根州馬斯基根）。甲酸 (FA) 購自 Fluka（德國施泰因海姆）。農藥標準品購自西格瑪奧德里奇公司（美國密蘇里州圣路易斯）。內標物（磷酸三苯酯，TPP）來自安捷倫科技公司（美國特拉華州威爾明頓）。標準品和內標 (IS) 儲備液（除多菌靈為 0.5 mg/mL 之外，其它均為2.0 mg/mL）分別用含甲醇和 0.1% FA 的乙腈或二甲基亞砜制備，并在 –20 °C 下保存。兩份濃度為 0.5 和 2.5 µg/mL 的 QC 加標溶液用含 0.1% FA 的 1:1 乙腈:水每日現場制備。將等量的 2.5 µg/mLTPP 加入到含 0.1% FA 的 1:1 乙腈:水中作為 IS 加標溶液。
儀器和材料• Agilent 1200 Infinity 系列• 電噴霧離子化 Agilent 6460 三重四極桿 LC/MS 系統• Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 緩沖提取試劑盒（部件號 5982-5755CH）• 適用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 試劑盒（部件號 5982-4956CH）• Eppendorf 微量離心管（Brinkmann 儀器，美國紐約州韋斯特伯里）• 飛鴿離心機（安亭科學儀器，中國上海）
HPLC 條件色譜柱： Agilent Poroshell 120 EC-C18，2.1 × 100 mm，2.7 µm（部件號 695775-902）流動相： A：0.1% 甲酸 (FA) 的水溶液B：0.1% FA 的乙腈溶液進樣量： 5 µL流速： 0.4 mL/min梯度： 時間 (min) %B0 51 53 507 908 908.2 59 5溫度： 30 °C后運行： 2 min總運行時間： 11 minMS 條件氣體溫度： 350 °C氣體流速： 10 L/min霧化器壓力： 40 psi毛細管電壓： 3500 V農藥在正離子模式下進行監測。分析物的其他條件見表 2。
樣品前處理雞肉購自當地市場。將肉切成小塊，置于潔凈的塑料袋中，并在–20 °C 下冷凍過夜。第二天只取需用量的冷凍雞肉，并充分混勻。將樣品*粉碎，制得均質樣品。確保所得的最終樣品中無明顯可見的雞肉塊。萃取/分離取 5 g (± 0.1 g) 均質樣品放入 50 mL 離心管中。采用 100 µL QC加標溶液制備 QC 樣品。在對照空白樣品外的其余所有樣品中均加入內標加標溶液 (100 µL)，制備內標濃度為 50 ng/g 的樣品溶液。蓋上離心管，渦旋振蕩 1 min。利用分液器向每個離心管中加入等量的水 10 mL。蓋上離心管，渦旋振蕩 1 min。利用分液器向每個離心管中加入等量的 15 mL 乙腈（含 0.1% 乙酸）。蓋上離心管，手動振搖 1 min。向每個離心管中直接加入 Bond ElutQuEChERS AOAC 萃取鹽包（含無水硫酸鎂 6 g 和醋酸鈉 1.5 g）。蓋緊離心管，手動劇烈振搖 20 s，確保溶劑與所有樣品充分混合，結晶聚集物*打碎。最后將樣品離心管以 4000 rpm 的轉速離心 5 min。
分散固相萃取的凈化從離心管中吸取 8mL乙腈上清液，移至 15mLBond ElutQuEChERSAOAC 分散 SPE 管。分散 SPE 管中含有 900 mg 無水硫酸鎂和150 mg C18。將離心管蓋緊，渦旋振蕩 1 min。然后用標準離心機以 4000 rpm 的轉速離心 5 min。取萃取液 2 mL 轉移至試管中，并在低于 40 °C 的溫度下于氮氣環境中干燥。最終殘留物用乙腈:水(1:9) 溶解并定容至 1 mL。然后將殘留物通過 0.2 µm 安捷倫優級針頭過濾器進行過濾（部件號 5190-5106）并用 LC/MS/MS 分析。
結果與討論本研究根據建議將同樣適用于其他食品方法的 AOAC 分散 SPE 試劑盒應用于雞肉分析。由于 LC/MS/MS 具有強大的選擇性，空白基質的 MRM 色譜圖中未顯示目標分析物的干擾峰。圖 1 和圖 2 中所示為空白基質（內標加標）和分散 SPE 方法處理后的10 ng/g 雞肉提取物的 LC/MS/MS 色譜圖?；厥章屎椭噩F性在粉碎的樣品中加入農藥標準品來評估回收率和重現性，農藥標準品濃度水平為 10 和 50 ng/g。各濃度水平重復分析 6 次?；厥章屎椭噩F性（以 RSD 表示）數據見表 4。由數據可知，所得的12 種農藥的回收率和精密度良好。
結論適用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 緩沖提取試劑盒和分散 SPE 試劑盒為雞肉中代表性農藥的純化提供了簡單、快速和高效的方法。根據加標基質的標準樣品來看，雞肉中多種類、多殘留農藥測定的回收率和重現性是可以接受的。同時，雞肉中的雜質和基質效應對目標化合物的定量無干擾。由于研究中所選擇的農藥代表了各種不同類別和性質的農藥，因此，Bond Elut QuEChERS AOAC 萃取和分散 SPE 試劑盒是用于類似食品基質中其他農藥分析的選擇。