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優化樣品前處理實現草本茶中農藥殘留的液質聯用儀分析
閱讀：532 發布時間：2022-5-19前言：草本茶已深深融入到多種文化中，通常被認為能夠改善身體健康狀況，降低各種疾病的發生，例如癌癥、中風和骨質疏松癥等 [1,2]。對茶的高需求量，要求實施現代化的農業生產方式，包括施用農藥來維持茶收成的穩定。無論是允許還是禁止使用的農藥，其最大殘留*越來越低，因此對草藥制品中頗多種類農藥的檢測就需要快速、穩定且高效的方法 [3]。該方法中至關重要的一步就是樣品前處理，尤其針對植物性基質，它們往往非常復雜，且包含有干擾的基質化合物，導致離子抑制、共流出和儀器污染。本研究采用快速、簡便、經濟、高效、耐用且安全的稱之為 QuEChERS 的技術完成草本紅茶和綠茶樣品的前處理。QuEChERS 包括如下三個簡便的步驟：1) 采用有機溶劑和分配劑鹽進行萃取；2) 采用吸附材料（分散吸附劑）進行樣品凈化；3) 液相色譜或氣相色譜分析，或兩者均采用 [4,5]。分散凈化吸附劑包括 C18、N-丙基乙二胺 (PSA) 和石墨化碳黑 (GCB)。對于包含大量色素的茶樣品，GCB 的使用越來越重要；但必須謹慎使用，因為它也會移除目標分析物，尤其是具有平面結構的化合物。采用 Agilent Bond Elut QuEChERS 預稱量的試劑盒優化 QuEChERS 方法，實現快速簡便的方法開發。該方法可以充分凈化高度著色的樣品，大多數農藥的回收率高，重現性好，平面結構農藥沒有明顯的保留損失。
材料與方法HPLC 級乙腈購自 Honeywell International, Inc.。反滲透水采用Millipore 水純化系統制備。甲酸 (98%) 為 ACS 級，購自 SigmaAldrich 公司。茶樣品來自多家供應商，由合作者友情提供。標樣來自 Accustandards 公司，為濃度 100 µg/mL 的乙腈溶液。將它們混合并用乙腈稀釋到適當濃度，儲存在冷凍箱 (–3 oC) 內。樣品前處理萃取：適用于 10 g 樣品的 Agilent Bond Elut QuEChERS Original萃取管（部件號 5982-5550）分散 SPE 凈化：Agilent Bond Elut QuEChERS 分散通用試劑盒，15 mL 分散 SPE 管（400 mg PSA，400 mg C18，45 mg GCB，1200 mg MgSO4）（部件號 5982-0029）過濾：Captiva Premium 注射式過濾器，尼龍膜，15 mm，0.2 µm（部件號 5190-5088）QuEChERS 萃取稱取干茶葉1±0.01 g，置50mL離心管中，按照要求給樣品加標。于離心管中加水 10 mL，加蓋并渦旋 1 min。樣品*潤濕后，將濃度 50 ng/mL的內標（樂果-d6、敵草隆-d6 和二嗪農-d10）乙腈溶液 (10 mL) 加入離心管中，加蓋，手動振搖 1 min，然后置超聲水浴中超聲 15 min。取出離心管，加入 Bond Elut QuEChERSOriginal 萃取鹽（4 g MgSO4，1 g NaCl），然后將離心管手動強力振搖 1 min。隨后將樣品以 4000 rpm 的轉速離心 5 min，實現水相和有機相溶劑的分離（圖 1，步驟 1）。
分散固相萃取離心后，將 6 mL 上層乙腈溶液轉移到 Bond Elut QuEChERS 分散通用試劑盒的 15 mL 離心管中。將離心管渦旋 1 min，然后以4000 rpm 的轉速離心 3 min。離心后，取 2 mL 凈化的萃取液加入 10 mL 試管中，氮氣流吹至近干。采用 0.7 mL H2O + 0.1% 甲酸 (FA) 混合溶劑、0.2 mL 乙腈，以及 0.1 mL 乙腈或校準標準液復溶樣品。接著，將樣品注射式過濾至自動進樣器樣品瓶中，用于 LC/MS/MS 分析（圖 1，步驟 2）。
表 1 為化合物分析的 MS/MS 參數，圖 2 是所有加標濃度 100 ppb農藥的 MRM 疊加色譜圖。
校準曲線和線性通過混合安瓿中的認證標準液來制備儲備標準液。將儲備標準液用乙腈適當稀釋來制備工作標準液。溶劑復溶時，將適量的工作標準液加入經 QuEChERS 萃取的空白綠茶和紅茶樣品中，制備基質匹配的標樣，濃度分別為 0.5、1、5、10、20、50、100 和200 ng/mL。將三種內標加入所有樣品，濃度 50 ng/mL，并采用完整 QuEChERS 工作流程進行萃取。通過這些標樣得到線性校準曲線，R2 不小于 0.992（數據未顯示）。
結果與討論QuEChERS 萃取鹽和凈化試劑盒的選擇為了實現最高的回收率和重現性，本研究評價了幾種萃取鹽試劑盒。在測試了 Bond Elut QuEChERS Original、AOAC 2007.01 和EN 15662 萃取鹽后，我們發現包含 1 g NaCl 和 4 g MgSO4 的原萃取試劑盒可獲得總體上最高的回收率。由于大量色素會與目標分析物一同萃取出來，因此，選擇包含 GCB 的分散凈化試劑盒是非常必要的。我們發現，使用包含 PSA、C18、GCB 和 MgSO4的 Bond Elut QuEChERS 通用試劑盒，可以獲得明顯更潔凈的樣品，以及更高的回收率，并且僅極小到中等程度地保留平面結構農藥（多菌靈、噻菌靈、三環唑和嘧霉胺）。回收率與重現性對于綠茶和紅茶基質中的 176 種農藥，絕大多數使用本方法均可獲得優異的回收率和重現性。對于綠茶樣品，濃度 10 ppb 82% 農藥的回收率和濃度 100 ppb 92% 農藥的回收率，均在 70 - 120%范圍內。對于紅茶樣品，濃度 10 ppb 76% 農藥的回收率和濃度100 ppb 88% 農藥的回收率均在 70 - 120% 范圍內。如圖 3 所示，還有較少農藥的回收率低于 50% 并且有一些農藥未能檢出。表 2列出了全部農藥以及各自的回收率和相對標準偏差。