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液質聯用儀測定多種水果中的 21 種 植物生長調節劑
閱讀：1003 發布時間：2022-3-2摘要：本應用簡報基于我們之前的研究[1] ，介紹了一種利用 QuEChERS 結合 HPLC-ESI-MS/MS 技術同時檢測水果中 21 種植物生長調節劑的方法。首先 用含 1% 乙酸的乙腈對樣品進行萃取，然后在硫酸鎂的存在下使用 C18 吸附 劑進行凈化。使用 Agilent Infinity UHPLC 1290 系統在 C18 色譜柱上分離所 得的溶液，并使用安捷倫 ESI-三重四極桿質譜儀在多反應監測 (MRM) 模式 下進行檢測。采用基質匹配外標校準方法進行定量分析。對于檢測的蘋果、 梨、草莓、葡萄和橙子基質，所有 21 種化合物均表現出 0.10–1000 µg/L 范圍內 2–3 個數量級的動態線性范圍，相關系數高于 0.99。該方法的檢出 限 (LOD) 和定量限 (LOQ) 分別在 0.020 µg/kg–6.0 µg/kg 和 0.10 µg/kg– 15.0 µg/kg 之間。對于所有化合物，平均加標回收率在 73.0%–111.0% 的 范圍內，且相對標準偏差（RSDs，n = 6）在 3.0%–17.2% 的范圍內。該方 法快速、簡單、有效、靈敏且準確，符合對水果中這些植物生長調節劑的測 定要求。
前言：植物生長調節劑 (PGRs) 通常是合成的化合物，其結構 和生理功能與天然和內源性植物激素相似。它們可能在 增強植物抗逆性、促進植物細胞分裂和生長以及提高植 物產量和質量方面發揮關鍵作用。因此，它們已廣泛應 用于農業生產中。但是，在缺乏監督的情況下過度使用 這些 PGRs，可能導致蔬菜和水果中 PGRs 殘留量升高， 從而可能威脅公共健康。目前，許多國家和國際組織已 制定相關法規，規定了各種水果中某些 PGRs 的最大允 許殘留* (MRLs)。歐盟已規定大多數新鮮水果中、噻苯隆和抑芽唑的 MRLs 分別為 0.02、0.01 和 0.01 mg/kg[2] 。日本將西瓜中抗倒酯的 MRL 限制為 0.02 mg/kg[3] ；中國將葡萄中氯吡脲的 MRL 限制為 0.05 mg/kg，將某些水果（如蘋果和梨）中 2,4-D 的 MRL 限制為 0.01 mg/kg[4] 。因此，開發一種高靈敏方 法來監測相關農產品中的這些 PGRs 殘留至關重要。 研究人員提出采用 LC/MS 代替 ELISA、GC 和 LC 等傳 統方法來測定 PGRs 殘留[5-7] 。由于 PGRs 種類很多， 化學結構差異巨大。這使得同時分析多類 PGRs 面臨非 常大的挑戰。目前報道的大多數 LC/MS 方法僅關注幾 類 PGRs。本應用簡報介紹一種通用方法，該方法可將 QuEChERS 提取凈化方法與 HPLC-MS/MS 技術結合起 來，用來同時測定多種水果中的常用 PGRs。
實驗部分：試劑與材料 21 種植物生長調節劑 (PGRs) 包括矮壯素、助 壯素、氯化膽堿、2,4,5-三碘苯甲酸、赤霉酸、環丙酰 草胺、脫落酸 (ABA)、氯吡脲、6-芐氨基嘌呤、噻苯隆、 2,4-D、調果酸、4-氯苯氧乙酸 (4-CPA)、1-萘乙酸、吲 哚-3-乙酸 (IAA)、抗倒胺、多效唑、烯效唑、抑芽唑和 抗倒酯，它們全部購自 Dr. Ehrensterfer（德國），純度 高于 96%。用甲醇（HPLC 級）配制濃度為 100.0 mg/L 的標準溶液， 并將其保存在 4 °C 下。使用初始流動相或基質提取物將 儲備液進一步稀釋至一系列濃度，用于外標定量。
樣品前處理 準確稱取 10 g 樣品，加入 50 mL 離心管中。然后加入 10 mL 酸化乙腈（1% 乙酸的乙腈溶液）。將混合物均質 化 2 分鐘。將 4 g MgSO4 和 1.5 g 乙酸鈉加入樣品瓶中。 然后將其渦旋混合 1 分鐘，再以 4000 rpm 離心 3 分鐘。 將 2 mL 上清液樣品溶液裝入潔凈的 2 mL 樣品瓶中，該 樣品瓶中含 25 mg C18 吸附劑和 150 mg 無水 MgSO4。 將樣品瓶渦旋混合 1 分鐘，然后以 16000 rpm 離心 5 分 鐘。使上清液通過 0.22 µm 膜的過濾，儲存在 4 °C 下， 待 LC-MS/MS 分析。
儀器條件 液相色譜配置和條件 • Agilent Infinity UHPLC 1290 二元泵 (G4220A) • 安捷倫高性能自動進樣器 (G4226A) • 安捷倫自動進樣器溫控 (G1330B) • 安捷倫柱溫箱 SL (G1316B) 色譜柱 Agilent XDB-C18, 4.6 × 100 mm, 5.0 µm 柱溫 35 °C 進樣量 5 µL 進樣針清洗 沖洗口（ 甲醇），5 秒 流動相 A) 5 mmol/L 乙酸銨/0.05% 甲酸水溶液 B) 乙腈 梯度流速 0.5 mL/min 梯度洗脫曲線如表 1 所示
質譜配置和條件 • 配備安捷倫噴射流離子源的 Agilent 6460 三重四極桿質譜儀 電離模式 正/負離子模式 掃描模式 多反應監測 (MRM) 毛細管電壓 4000 V 噴嘴電壓 500 V 霧化氣壓力 45 psi 干燥氣溫度 300 °C 干燥氣流速 10 L/min 鞘氣溫度 375 °C 鞘氣流速 11 L/min
結果與討論 質譜檢測的優化 最初，將各種化合物的標準溶液注入質譜儀中來優化質 譜采集條件。選擇穩定的母離子，例如正離子模式下的 [M+H] + 或負離子模式下的 [M-H] – 實施進一步碎裂。某 些化合物（如 6-BA、噻苯隆、氯吡脲和抗倒胺）可同 時生成 [M+H] + 和 [M-H] –。考慮到化合物的性質和靈敏 度以及進行時間段掃描的必要性，采用負離子模式檢測 6-BA、噻苯隆和氯吡脲，采用正離子模式檢測抗倒胺。 選擇母離子后，然后優化碎裂電壓以使母離子獲得最高 的靈敏度。然后通過子離子掃描和 MRM 掃描獲得每個 母離子的特異碎片離子和碰撞能量，從而使得每個化合 物的響應盡可能高，干擾盡可能低。