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采用三重四極桿液質聯用系統對畜禽產品中獸藥多殘留進 行分析
閱讀：839 發布時間：2021-12-13摘要 本文采用安捷倫三重四極桿液質聯用系統，建立了同時檢測畜禽產品中 52 種獸 藥（包括磺胺、喹諾酮、大環內酯、激素和林可胺類等）的分析方法。此方法 使用配有 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色譜柱（薄殼型反相 C18 填料）的 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統進行分離，使用配有安捷倫噴射流 (AJS) 電噴霧離子源 和 iFunnel 離子傳輸聚焦技術的 Agilent 6495 三重四極桿液質聯用系統在正離子模 式下進行監測。該方法在 1-100 ng/mL 濃度范圍內線性關系性良好，相關系數 R2 ≥ 0.990；在添加濃度為 1 µg/kg 時，各化合物峰面積穩定性在 0.5%-11.9% 之間； 定量下限可達到 0.1 µg/kg-2.0 µg/kg。通過對方法靈敏度、精密度和線性范圍等 方法學參數進行考察，表明所建立的方法能在 20 min 內對畜禽產品中的 52 種獸 藥類目標化合物完成快速、高靈敏度的檢測分析，*法規監測要求。
前言 獸藥殘留是指食用動物在應用獸藥（包括藥物添加劑）后，蓄積或儲存在動物 細胞、組織、器官內，或進入動物乳汁及家禽蛋中的藥物原型及其有毒理學 意義的代謝物和藥物雜質的統稱[1,2]。近年來，隨著獸藥種類的快速增加，使 用范圍的快速擴大，以及消費者對食品安全問題及自身健康的日益關注，動 物源性食品中獸藥殘留問題已成為國內外學者廣泛關注的熱點。由于獸藥殘 留種類繁多、理化性質各異、樣品中殘留水平低，其分析過程具有形式多樣 （游離態/結合態）、基質復雜、干擾物質多（包括蛋白、脂質等）等特點，這些 特點也成為獸藥殘留分析的技術難點。目前，動物源性食品中獸藥殘留分析的主要技術手段之一 是采用靈敏度高、特異性好的 LC/MS 技術，前處理方式 多按藥物性質和類別分類進行提取和凈化。近年來，隨著 技術手段的不斷進步，LC/QQQ 技術在多獸藥殘留分析方 面的應用取得了長足的進步。在樣品處理方面，除了傳統 的固相萃取技術外，基質分散 (QuEChERS)、在線柱切換 等技術的應用也大大提高了藥物提取凈化所覆蓋的種類和 范圍[3-6]。 本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統/6495 三重四極 桿液質聯用系統，建立了同時快速檢測畜禽產品中常見的 52 種獸藥的可靠定量方法。該方法可以滿足對畜禽動物組 織中常見多種獸藥殘留的高通量快速監測。
實驗部分 試劑與化學品 所有試劑和溶劑均為色譜純或者分析純級。甲醇和乙腈購 自德國默克 (MERCK)。甲酸和乙酸銨購自美國 Sigma-Aldrich 公司。所用實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統現制備 的高純去離子水。混合標準品 (10 µg/mL) 由煙臺杰科檢測 服務有限公司提供。 儀器 實驗采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統進行分離，其由 下列部件組成： • Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) • Agilent 1290 Infinity 標準自動進樣器 (G4226A) • Agilent 1290 Infinity 自動進樣器冷卻器 (G1330B） • Agilent 1290 Infinity 柱溫箱 (G1316C) 采用配有安捷倫噴射流 (AJS) 電噴霧離子源和 iFunnel 離子 傳輸聚焦技術的 Agilent 6495 三重四極桿液質聯用系統，在 正離子模式下進行檢測。 采用 Agilent MassHunter 工作站軟件（B.07 版本）進行數據 采集和分析。 標準溶液配置 使用時用乙腈:水 (10:90) 混合溶劑對混合標準品進行適當的 逐級稀釋，從而得到濃度分別為 1、5、10、20、50 ng/mL 的混合標準溶液，臨用新制。樣品前處理 畜禽產品的樣品前處理過程可參照《QuEChERS-超高效液相 色譜-串聯質譜法同時檢測豬肉中 121 種獸藥》[7] 和《采用 LC/MS/MS 結合改進的 QuEChERS 方法對動物源食品中的 36 種獸藥進行篩查》[8] 文中所述方法。
液相色譜條件 色譜柱： Agilent Poroshell 120 EC-C18， 3.0 x 100 mm, 2.7 µm 柱溫： 40 °C 進樣量： 2 µL 自動進樣器溫度： 10 °C 流動相： A) 含 0.1% 甲酸和 2.5 mmol/L 乙酸銨的 水溶液 B) 乙腈 流速： 0.4 mL/min 梯度程序： 時間 B% 0.0 5 1.0 5 6.0 20 10.0 40 15.0 98 17.5 98 停止時間： 18.0 min 后運行時間： 3.0 min 質譜條件 離子模式： 正離子 干燥氣溫度： 200 °C 干燥氣流量： 16 L/min 鞘氣溫度： 350 °C 鞘氣流量： 11 L/min 霧化器壓力： 35 psi 毛細管電壓： 3000 V 噴嘴電壓： 0 V ? EMV： 300 V MS1 和 MS2 分辨率： 單位分辨率 MRM 參數： 如表 1 所示
結果與討論 如圖 1 所示，采用配有 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱（薄殼 型填料，3.0 x 100 mm，2.7 um）的安捷倫三重四極桿液質 聯用系統，可在 20 min 內對 1 ng/mL 混合標準溶液中 52 種 獸藥進行有效分離，且分離效果及峰形均能滿足方法要 求。Poroshell 120 EC-C18 色譜柱具有較高柱效、較低柱 壓和較高載樣量等特點，非常適合分析畜禽樣品基質中 的多藥物殘留。流動相中添加了 0.1% 甲酸和 2.5 mmol/L 乙酸銨，可以有效促進正模式下的離子化效率。 通過 S/N ≥ 10，計算得到 52 種獸藥的定量下限均在 0.1- 2.0 µg/kg 之間，*動物源性食品中多獸藥殘留的限 量檢測要求。6495 三重四極桿液質聯用系統可充分滿足獸藥多殘留檢測 的要求，如表 1 所示為各獸藥的 MRM 參數列表，其中給出 了碎裂電壓參考值。6495 的新型預四極桿離子傳輸聚焦技 術、彎曲錐形碰撞池、以及高能電子倍增管檢測器設計， 可以大大提高離子的聚焦傳輸，產生更有效的離子碎片和 更高的離子/電子轉化率，從而大大提高了檢測靈敏度、穩 定性及抗污染能力。 采用本文所述方法在濃度范圍 1 -100 ng/mL 內對 52 種獸藥 的線性相關性進行討論。結果表明，所有化合物在此濃度 范圍內具有良好的線性相關性，相關系數 R2 均大于 0.990， 分別以奧喹多司、氯吡多、諾氟沙星、磺胺對甲氧嘧啶、 潑尼松龍和泰洛星為例，如圖 2 所示。
在雞肉基質提取液中添加 1 µg/kg 濃度的混合標準溶液，連 續進樣 10 針，進行方法穩定性討論。如圖 3 所示，在低濃 度添加水平下，52 種獸藥的峰面積 RSD 值均在 0.5%-11.9% 之間，*測試的穩定性要求。
結論 本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統/6495 三重四極桿液質聯用系統成功實現了對畜禽產品中 52 種多獸藥殘留 的高靈敏度、快速、穩定的定量分析。本方法各項參數完 全滿足動物源性食品中多獸藥殘留的*檢測要求和快速 檢測。