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使用高效液相色譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中的氮哌酮及其代謝物殘留
閱讀：643 發(fā)布時(shí)間：2021-12-3前言:氮哌酮 (Azaperone) 是一種丁酰苯類神經(jīng)安定藥，動(dòng)物經(jīng)肌肉注射此藥后可消 除緊張感、降低活動(dòng)力，使動(dòng)物對(duì)環(huán)境淡漠并長(zhǎng)期處于安靜狀態(tài)，在長(zhǎng)途運(yùn)輸 中常常給豬等動(dòng)物使用該藥。氮哌醇 (Azaperol) 是氮哌酮在動(dòng)物體內(nèi)的代謝產(chǎn) 物，與原形藥物氮哌酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)相近。通過食物鏈，氮哌酮及其代謝產(chǎn)物氮 哌醇會(huì)在人體內(nèi)蓄積，對(duì)人體產(chǎn)生直接的危害，其不良反應(yīng)主要體現(xiàn)為心血管 效應(yīng)，用藥后動(dòng)脈壓下降，皮膚血管擴(kuò)張使皮膚成粉紅色，心率和心輸出量 減少。 本文所述方法參照 GB29709-2013，建立了動(dòng)物源食品中氮哌酮及其代謝物分析 的高效液相色譜法。本方法適用于豬的肌肉、肝、腎中氮哌酮和氮哌醇?xì)埩袅?的檢測(cè)。方法利用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱對(duì)樣品進(jìn)行凈化，并 利用安捷倫的 Agilent Poroshell 120 EC-C18 快速柱對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行快速分析。
氮哌酮及其代謝物分析 對(duì)試樣進(jìn)行樣品前處理：稱取 5 ± 0.05 g 試樣于 50 mL 離心管中，加 10 mL 乙腈， 渦旋 1 min，超聲 10 min，5000 r/min 離心 5 min，取上清液于 50 mL 離心管中； 殘?jiān)屑?10 mL 乙腈，重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，于 45 °C 氮?dú)獯祾咧两?干；加 5 mL 2% 甲酸水溶液于離心管中，渦旋 1 min，超聲 5 min 使充分溶解，加 10 mL 正己烷，振蕩 5 min，5000 r/min 離心 5 min，棄掉上層正己烷層（包含兩相 間的脂肪膜），用氮?dú)獯祾呷コ龤堄嗟恼和椋瑐溆谩?/span>
所得樣品提取液經(jīng) Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱 凈化和富集后（圖 1 所示為固相萃取操作流程），使用配備 了 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色譜柱的高效液相色譜系統(tǒng) 對(duì)其中的氮哌酮及其代謝物進(jìn)行快速分析（表 1 所示為高 效液相色譜分析條件）。
本方法在 GB29709-2013 基礎(chǔ)上進(jìn)行了前處理和檢測(cè)方法 的優(yōu)化，在保證目標(biāo)物回收率的情況下，顯著降低了各種 組織來源的本底干擾，能獲得更低的檢測(cè)限，同時(shí)使分析 方法更加穩(wěn)定準(zhǔn)確，如圖 2-4 所示。方法中利用 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱對(duì)樣品進(jìn)行凈化，并利用安捷倫的 Poroshell 120 EC-C18 快速柱對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行快速分析， 方法檢測(cè)限為 2 µg/kg，定量限為 5 µg/kg；50 µg/kg 加標(biāo) 水平的豬腎樣品連續(xù)進(jìn)樣六次考察重現(xiàn)性，氮哌醇峰面積 RSD 值為 0.76%，氮哌酮峰面積 RSD 值為 0.53%，結(jié)果表現(xiàn) 出*的重現(xiàn)性，如圖 5 所示；在 12.5-1000 ng/mL 線性范 圍內(nèi)氮哌醇和伊氮哌酮的線性相關(guān)性良好，如圖 6 所示； 在 5-100 µg/kg 的加標(biāo)水平下，氮哌酮和氮哌醇的回收率為 58.9%-83.8%，RSD 為 0.9%-7%，如表 2-3 所示。
本方法與 GB 29709-2013 相比，采用了 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱對(duì)樣品進(jìn)行凈化，并利用安捷倫的 Poroshell 120 EC-C18 快速柱對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行快速分析。Plexa PCX 填料是新型的高級(jí)聚合物陽離子交換填料，具有更高 的萃取效率。Poroshell 120 EC-C18 快速柱與常規(guī)分析柱相比， 在提高柱效的同時(shí)顯著地縮短了分析時(shí)間，這在高通量檢 測(cè)方面有重要意義。本方法簡(jiǎn)化了萃取凈化的步驟，提高了前處理和色譜分析效率，*國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法要求的 檢測(cè)限和定量限，獲得了較高的回收率與穩(wěn)定性。因此采 用 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱和 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱，能夠滿足 GB29709-2013 規(guī)定的對(duì)動(dòng)物源食品中氮 哌酮及其代謝物的測(cè)定要求。