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Agilent Ultivo對中藥材中 30 種禁用農(nóng)藥進行檢測
閱讀：928 發(fā)布時間：2021-8-19摘要 ：本文采用 Agilent Ultivo 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立了藥材及飲片中的禁用農(nóng)藥多殘留 分析方法。該方法針對不同中藥材基質(zhì)，采用以 QuEChERS 為主的樣品前處理方案，符 合中國藥典 2020 版對中藥殘留農(nóng)藥提取和凈化的要求；同時以固相萃取法作為對復(fù)雜中 藥基質(zhì)凈化的補充。分離方法基于 Agilent 1290 Infinity HPLC 和 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 液相色譜柱。所用檢測系統(tǒng)為安捷倫配備 Cyclone Ion Guide 氣旋離子導(dǎo) 軌及 Vortex Collision Cell 渦流碰撞室的小型化 Ultivo 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，該系統(tǒng) 還配備高效抗污染的噴射流 (AJS) 離子源，在正離子模式下完成對 30 種農(nóng)藥的分離和檢 測。該方法在不同農(nóng)藥濃度范圍內(nèi)具有良好的線性，相關(guān)系數(shù) R2 ≥ 0.9990，定量限均滿 足《0212 藥材和藥片檢定通則》[1] 的要求。采用 Agilent Bond Elut QuEChERS 中國藥典中 藥中農(nóng)殘專用凈化包，可有效凈化樣品，消除基質(zhì)干擾，使不同中藥材基質(zhì)中的分析物回 收率在 50%–130% 之間。證明安捷倫液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)在滿足藥典檢測要求的基礎(chǔ)上，能夠 實現(xiàn)對不同藥材中農(nóng)藥殘留的高靈敏度、高通量檢測。
前言：中藥材中的主要常見農(nóng)藥殘留包括有機氯類、有機磷類、擬除菊酯類、氨基甲酸酯類等。這些農(nóng)藥污染主要源于種植過程中的 濫用農(nóng)藥，其次來源于中藥材生長的土壤環(huán)境以及采收、儲藏過 程中受到的農(nóng)藥二次污染[2]。農(nóng)藥殘留與中藥材的質(zhì)量安全密切 相關(guān)。科學(xué)種植中藥材、合理有效使用農(nóng)藥，并將農(nóng)藥殘留風(fēng)險 降到水平，是我國中藥材產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要保證[3]。 2019 年 8 月，國家藥典委員會擬修訂《中國藥典》2015 年版四 部“0212 藥材和飲片檢定通則"，對檢定對象及*進行了 明確規(guī)定，并在第五法（“2341 農(nóng)藥殘留量測定法"中公示新 增了“第五法 藥材及飲片（植物類）中禁用農(nóng)藥多殘留測定法） 中給出禁用農(nóng)藥的具體測定方法。其中第五法要求以 LC-MS/MS 和 GC-MS/MS 為主要檢測手段。檢測的農(nóng)藥有 33 種，共計 55 種 化合物，并規(guī)定所有禁用農(nóng)藥都不得檢出（測定含量低于定量限 0.01–0.1 mg/kg）。30 種化合物通過 LC-MS/MS 方法進行檢測， 35 種化合物通過 GC-MS/MS 方法進行檢測，其中 11 種化合物同 時適用 LC-MS/MS 和 GC-MS/MS 方法。 安捷倫 LC-MS/MS 技術(shù)平臺具有高選擇性、高靈敏度、高通量 和高效率等特點，適用于同時分析基質(zhì)復(fù)雜、類型多樣的中藥材 中的多種農(nóng)藥殘留。本應(yīng)用簡報展示了一種對中藥材中 30 種農(nóng) 藥進行分離檢測的 LC-MS/MS 方法，該方法將低擴散、低殘留 的 Agilent 1290 Infinity HPLC 與 Agilent Ultivo 三重四極桿液質(zhì)聯(lián) 用系統(tǒng)結(jié)合使用。*化的 LC-MS/MS 方法同時適用于 Agilent Ultivo、6470、6495 等不同型號的三重四極桿質(zhì)譜儀器，方法轉(zhuǎn) 化無縫對接。
實驗部分：試劑和樣品 乙腈為分析純，購自德國默克 (Merck)；甲酸和甲酸銨為分析 純，購自美國 Sigma-Aldrich 公司；所用實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水；30 種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品 溶液（藥典 2341 農(nóng)殘測定 LC-MS）由天津阿爾塔科技公司提供 （部件號 1ST29486），其中各化合物的濃度如表 2 所示。測定的 7 種中藥材 白芍、麥冬、板藍根、黃芩、何首烏、佛手、厚樸等 均來源于正規(guī)中藥材批發(fā)市場。
儀器和設(shè)備 液相部分為 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)，該系統(tǒng)主要包括 以下組件： – Agilent 1290 Infinity 二元泵（部件號：G4220A） – Agilent 1290 Infinity 標(biāo)準(zhǔn)自動進樣器（部件號：G4226A） – Agilent 1290 Infinity 柱溫箱（部件號：G1316C） – 質(zhì)譜部分為 Agilent Ultivo 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，其配備噴 射流 (AJS) 離子源 – 采用 Agilent MassHunter B.10 工作站軟件進行數(shù)據(jù)采集、確 證和定量分析 標(biāo)準(zhǔn)品配制 取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液（其中 30 種農(nóng)藥化合物的濃度各不相同，將 其稀釋 1000 倍，即達到藥典規(guī)定的定量限），用含 30% 水的乙 腈溶液逐級稀釋，得到濃度分別為 0.1、0.2、0.5、1、5、25、 50 ng/mL 的標(biāo)樣（以甲an磷為例）。其它農(nóng)藥以相同的比例逐級 稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。
液相色譜條件 色譜柱： Agilent Poroshell 120 EC-C18, 2.1 × 100 mm, 2.7 µm （部件號 695775-902），或 Agilent Poroshell 120 SB-C18, 2.1 × 100 mm, 2.7 µm（部件號 685775-902） 流速： 0.3 mL/min 柱溫： 40 °C 進樣體積： 2 µL 流動相： A) 0.1% 甲酸（含 5 mmol/L 甲酸銨）水溶液 B) 0.1% 甲酸（含 5 mmol/L 甲酸銨）乙腈:水溶液 = 95:5 梯度程序： 時間 (min) B% 0.0 30% 1.0 30% 12.0 100% 14.0 100% 14.1 30% 后運行時間： 3 min
質(zhì)譜條件 離子源： AJS 源 離子模式： 正離子模式 干燥氣溫度： 250 °C 干燥氣流量： 6 L/min 鞘氣溫度： 350 °C 鞘氣流量： 11 L/min 霧化器壓力： 45 psi 毛細(xì)管電壓： 4000 V 噴嘴電壓： 0 V MS1 和 MS2 分辨率：單位 監(jiān)測模式： 動態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測 (dMRM) MRM 參數(shù)： 如表 1 所示，涵蓋 2015 版藥典第五法 中所要求離子；并添加部分高強度離子， 用“**"標(biāo)注，作為定性參考依據(jù)。
結(jié)果與討論 如圖 2 所示，采用上文所述的色譜和質(zhì)譜條件，在 10 min 內(nèi)即可完成對購買的標(biāo)準(zhǔn)品通過稀釋后配制的 30 種農(nóng)藥混合標(biāo) 準(zhǔn)品溶液進行色譜分離，且各化合物之間的分離效果及色譜峰形均滿足藥典分析要求，同時展現(xiàn)了薄殼填料型 C18 色譜柱 *的分離性能。
結(jié)論 本方法采用 Agilent 1290 Infinity UHPLC 結(jié)合 Ultivo 三重四極桿液 質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立了對應(yīng)于《中國藥典》規(guī)定的農(nóng)藥殘留 LC-MS/MS 分析方法。該方法靈敏度高、專屬性強，能夠結(jié)合 Agilent Bond Elut QuEChERS 快速前處理方法對不同中藥材基質(zhì)中的殘留農(nóng)藥進 行準(zhǔn)確的定量分析，結(jié)果滿足 2020 版藥典 2341 第五法的要求。