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技術文章

高效液相色譜-熒光檢測法測定飼料中的乙氧酰胺苯甲酯

閱讀:895          發布時間:2021-7-26

前言:乙氧酰胺苯甲酯,又名衣索巴,俗名球蟲酯,是尼卡巴嗪和氨丙啉等抗球蟲藥的增效劑。該藥品抗球蟲作用及機理與磺胺藥和抗菌增效劑相同,本身具有抗原蟲活性,它通過干擾四氫葉酸的合成阻止裂殖體的正常發育,從而產生抗球蟲作用。2020 年農業農村部公告第 316 號-6-2020 飼料中乙氧酰胺苯甲酯的測定 高效液相色譜法正式頒布。本文所述方法以此標準為基礎,重點優化了前處理流程。本方法采用 AgilentBond Elut AL-N 柱對樣品進行萃取和凈化,并利用安捷倫 Poroshell 120 SB-C18 色譜柱對目標物進行快速分析,熒光檢測器進行檢測,方法檢測限為 0.0048 μg/g,定量限為 0.016 μg/g。該方法簡化了公告標準中的前處理方法,在一定程度上節約了分析成本,提高了分析效率。對于基質更為復雜的飼料樣品,仍需參考農業農村部公告第 316 號-6-2020 所規定檢測方法。

乙氧酰胺苯甲酯的分析樣品前處理及分析條件取飼料樣品 5 (±0.05) g,于 50 mL 離心管中。根據生產實際需要,按照表 1 所示添加水平,向飼料樣品中添加乙氧酰胺苯甲酯標準品,制備得到加標樣品,用于考察方法的穩定性和準確度。

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加標后,將飼料混合均勻,靜置過夜。加入 20 mL 乙腈萃取,渦旋混合 1 min,超聲 10 min,5000 r/min 離心后取 10 mL 上清液在 30–40 °C 下氮吹近干;復溶于 5 mL 正己烷:丙酮 (v/v, 9:1)中;渦旋混合 1 min,超聲 10 min,5000 r/min 離心 10 min,上清液經過 Bond Elut Al-N SPE 柱進行凈化處理(SPE 流程見圖 1);接收洗脫液,氮吹近干后,用 1 mL 甲醇重新定容,供LC-FLR 檢測,分析條件如表 2 所示。每個加標樣品分別做三個平行樣品進行測定。


色譜分析條件的優化色譜分析采用安捷倫的 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱,在普通液相色譜儀上可以實現快速分析。8 min 內即可完成整個方法的運行。由圖 4 可以看出,連續進樣 6 針,色譜圖基本*重合,表明方法具有重復性。在 0.1–20.0 μg/g 范圍內,儀器具有良好的線性,線性相關系數 R2 為 0.9989,見圖 4。


結論本方法基于 Agilent Bond Elut AL-N SPE 柱,結合 Poroshell 120SB-C18 快速色譜柱,在普通液相色譜儀上實現了對飼料中乙氧酰胺苯甲酯的含量分析。方法準確度和精密度均可達到標準要求,同時簡化了前處理方法,大大提高了分析效率。該方法適用于實際生產中飼料中乙氧酰胺苯甲酯含量的測定。


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