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使用 （LC/MS/MS） 對動物組織和雞蛋中的獸藥進行多類別殘留分析
閱讀：701 發(fā)布時間：2021-3-1摘要 ：本應(yīng)用簡報介紹了一種針對不同動物源性食品樣品中多類別獸藥的篩查和定 量而開發(fā)的工作流程解決方案，內(nèi)容涵蓋從樣品前處理到結(jié)果定量分析。這 些獸藥屬于 32 個不同的化學(xué)類別，包括大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺類、四環(huán)素類、 β-內(nèi)酰胺類、β-激動劑類、氯霉素類、硝基咪唑類、頭孢烯類、阿維菌素 類、苯并咪唑類、糖皮質(zhì)激素類、非甾體抗炎藥 (NSAID) 類、肽類、抗球蟲 藥類、喹諾酮類、咪唑類、雄激素類、聚醚類、三苯甲烷類、吩噻嗪類、喹 喔啉類、抗吸蟲藥類、抗病類、農(nóng)藥類、氨苯砜類、有機酸類、硝基類 化合物、鎮(zhèn)靜劑類等。動物源性食品樣品包括豬、牛和雞的肌肉和肝臟以及 魚和雞蛋。樣品前處理包括利用酸化乙腈實現(xiàn)快速高效的蛋白質(zhì)沉淀和目標(biāo) 物提取，然后使用 EMR-Lipid 增強型脂質(zhì)去除凈化管（部件號 5982-1010）和 Polish 凈化鹽析萃取步驟相結(jié)合（部件號 5982-0102）進行進一步凈化。該工 作流程解決方案支持與安捷倫噴射流離子源結(jié)合使用的多種類型的安捷倫串 聯(lián)質(zhì)譜儀（Agilent 6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)、Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)和 Agilent 6495 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)）。
前言 獸藥 (VD) 在獸醫(yī)業(yè)中廣泛應(yīng)用于治療和預(yù)防疾病，或用 于提高生長和飼養(yǎng)效率。如果獸藥施用不當(dāng)，可能導(dǎo)致 供人食用的動物源性食品中存在獸藥殘留，從而造成健 康風(fēng)險。在長期暴露下，盡管一些抗微生物劑在食品中 的濃度非常低，也可能導(dǎo)致人群耐藥性的提高。 為更好地控制獸藥的使用并保護公眾健康，國家監(jiān)管機 構(gòu)對肉類及其他食品中的獸藥殘留*進行了監(jiān)管。 中國農(nóng)業(yè)部 (MOA) 發(fā)布的第 235 號公告中將獸藥分為 四類：I 類藥物允許使用，且沒有規(guī)定大殘留* (MRL)。II 類藥物允許用于治療疾病，需要遵守 MRL 規(guī) 定。III 類藥物允許用于治療疾病，但是在人類食用的樣 品中不得檢出。IV 類藥物禁止使用，不允許在樣品中檢 出。中國政府每年都會制定一系列用于控制 II、III 和 IV 類獸藥使用的監(jiān)測計劃。當(dāng)前，中國發(fā)布的獸藥殘留分 析標(biāo)準(zhǔn)方法重點針對僅一種化學(xué)類別或幾種化學(xué)類別的 藥物（如磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類等）。可能需要 數(shù)天時間才可完成終檢測并得到報告。此類工作流程 不僅耗時、費力且成本高，而且在處理大量樣品時效率 很低。我們的工作流程解決方案旨在使實驗室能夠同時 分析多種化學(xué)類別的 180 多種經(jīng)常監(jiān)測的 VD。該方法中 的獸藥清單基于第 235 號公告（中國農(nóng)業(yè)部）。 動物源性食品樣品包含大量蛋白質(zhì)和脂類，為樣品前處 理帶來了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。在本研究中，選擇酸化乙腈（5% 甲酸）作為萃取溶劑，能夠?qū)崿F(xiàn)高效的蛋白質(zhì)沉淀，將 分析物萃取到有機相中。利用 Agilent Bond Elut EMR-Lipid 增強型脂質(zhì)去除凈化管 (EMR-Lipid) 與 Polish 凈化鹽析萃 取步驟相結(jié)合進行凈化。EMR-Lipid 增強型脂質(zhì)去除產(chǎn)品 是一種新型吸附材料，能夠選擇性去除樣品中的主要脂 類且不影響分析物回收率。
實驗部分 標(biāo)準(zhǔn)品與試劑 獸藥標(biāo)準(zhǔn)品購自 Dr. Ehrenstorfer GmbH、WITEGA laboratorien Berlin-Adlershof GmbH、Toronto Research Chemicals (TRC) 或 AccuStandard 公司。在流動相配制中使用超純水 （> 18.2 M?，ELGA VEOLIA PureLab Chrous 系統(tǒng)）、乙腈 （LC/MS 級，F(xiàn)luka）和甲酸（~98%，質(zhì)譜用，F(xiàn)luka）。 在樣品前處理中使用乙腈（ACN，HPLC 級，SigmaAldrich）、二甲基亞砜（DMSO，> 99.9%，Aldrich）、乙酸 銨（≥ 98%，Sigma-Aldrich）和甲酸（~98%，HPLC 級， Fluka）。 樣品前處理 開發(fā)出一種快速簡單的樣品前處理方法。使用酸化乙腈 萃取均質(zhì)樣品，還用作蛋白質(zhì)沉淀步驟。采用 Agilent EMR-Lipid 增強型脂質(zhì)去除產(chǎn)品選擇性去除脂類而不吸附 目標(biāo)化合物，然后通過終 Polish 凈化鹽析萃取步驟進 行凈化，對萃取物進行進一步凈化。 該樣品前處理方法適用于許多類型的動物源性食品樣 品，包括豬、牛和雞的肌肉和肝臟以及魚和雞蛋。
儀器 采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)進行分析，其中 包括： • 多獸殘解決方案包 (G6413AA) • Agilent 1290 Infinity II 二元泵 (G7120A)，配備 35 µL Jet Weaver • Agilent 1290 Multisampler (G7167B)，配備 20 µL 定量環(huán) • Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫箱 (G7116B) 對三種型號的串聯(lián)質(zhì)譜儀進行了測試： • 采用噴射流技術(shù)的 Agilent 6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用 系統(tǒng) (G6460CA) • 采用噴射流技術(shù)的 Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用 系統(tǒng) (G6470AA) • 采用 iFunnel 和噴射流技術(shù)的 Agilent 6495 三重四極桿 液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) (G6495A)
方法開發(fā)與驗證 在方法開發(fā)和驗證過程中考慮下列性能特性：動態(tài)范 圍、檢測限 (LOD)、定量限 (LOQ)、回收率和重現(xiàn)性。 在 Agilent 6495 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)上使用五種基 質(zhì)（豬肉、豬肝、鰻魚、雞肉和雞蛋）在三種加標(biāo)濃度 （1 ng/g、5 ng/g 和 20 ng/g）下對解決方案進行了全面 驗證。在 Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)上使用豬肉基質(zhì)，在三種加標(biāo)濃度（1 ng/g、5 ng/g 和 20 ng/g） 下對解決方案進行全面驗證。在 Agilent 6460 三重四極桿 液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)上使用豬肉和豬肝基質(zhì)，在三種加標(biāo)濃度 （1 ng/g、5 ng/g 和 20 ng/g）下對解決方案進行全面 驗證。
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結(jié)論 本文介紹了安捷倫開發(fā)的主要針對中國用戶的多獸藥殘 留分析工作流程解決方案，用于篩查和定量分析不同動 物源性樣品中的多獸藥殘留。該解決方案支持安捷倫多 種液相色譜系統(tǒng)和帶噴射流技術(shù)離子源的串聯(lián)四級桿質(zhì) 譜系統(tǒng)的自由搭配。我們已經(jīng)證明，這套從樣品前處理 到結(jié)果分析的完整工作流程解決方案可用于分析大多數(shù) 類型的動物源性食品樣品，具有高靈敏度以及良好的準(zhǔn) 確度和精密度。該工作流程解決方案能夠通過一種方法 分析涵蓋 32 種不同類別的 180 多種獸藥，有助于顯著提 高樣品通量，且不損失數(shù)據(jù)質(zhì)量、穩(wěn)定性和靈敏度。